ResumoNo presente trabalho, um teste imunoenzimático por competição (cELISA) foi padronizado com a proteÃna recombinante de superfÃcie rMSP5, clonada a partir do gene msp5 do isolado PR1 de A. marginale. O sequenciamento mostrou que o gene que codifica a rMSP5/PR1 tem 98% de identidade com os isolados Flórida e Santa Maria, 97% com isolados de Pernambuco, Brasil e Havana, Cuba e 91% com A. centrale. O teste de cELISA-PR1 foi comparado com os testes de IFI e cELISA-USA. Para a padronização e validação do cELISA-PR1, foram utilizados 380 soros bovinos comprovadamente positivos ou negativos pelo cELISA-USA. Desse total, 245 soros positivos eram de animais de área endêmica e 135 soros eram negativos, de área livre de anaplasmose. Na padronização, foram utilizados 283 soros de bovinos, dos quais 135 eram negativos e 148 positivos. Os testes de cELISA-PR1 e IFI apresentaram especificidade de 100 e 99,3%, sensibilidade de 100 e 98%, com coeficiente kappa de 0,993 e 0,978, respectivamente. Na validação do teste, foram utilizados 245 soros de bovinos de áreas endêmicas para anaplasmose, testados pelo cELISA-PR1 e IFI e apresentaram especificidade de 96,7 e 69,1%, sensibilidade de 98,9 e 96,3% e coeficiente kappa de 0,956 e 0,699, respectivamente. Esses resultados permitem afirmar que o teste de cELISA-PR1 apresentou performance equivalente ao cELISA-USA, podendo também ser utilizado em estudos epidemiológicos, programas de controle e movimentação internacional de animais, enquanto a IFI, com os resultados menos precisos apresentados, não deve ser utilizada em situações que requerem maior rigor no diagnóstico.Palavras-chave: Anaplasma marginale, ELISA, IFI, proteÃnas, bovinos.
AbstractA competitive enzyme-linked immunosorbent test using the PR1 recombinant major surface protein 5 (rMSP5-PR1-ELISA)of Anaplasma marginale was standardized and validated using sera from anaplasmosis free and endemic regions. The sequencing of the msp5 gene of PR1 isolate showed 98% of identity with the Florida and Saint Maries isolates, 97% with Brazil (Pernambuco) and Havana isolates; and 91% with A. centrale. The cELISA-PR1 test was compared to IFI and cELISA-USA. For the standardization and validation of the cELISA-PR1, 380 bovine sera were used, whereas 245 truly positives and 135 truly negatives sera tested by the cELISA-USA. In the standardization of the cELISA-PR1 135 negative and 148 positive bovine sera were used. The cELISA-PR1 and IFI tests showed 100 and 99.3% specificity, 100 and 98%, sensibility, and a kappa coefficient of 0.993 and 0.978, respectively. For test validation, 245 bovine sera from an anaplasmosis endemic area were analyzed by the cELISA-PR1 and IFI, which showed 96.7 and 69.1% specificity, 98.9 e 96.3% sensibility and kappa coefficient of 0.956 and 0.699, respectively. These results indicate that the cELISA-PR1, likewise the cELISA-USA, could sensitively and specifically detect cattle naturally infected with A. marginale and would be recommended for epidemiological studies, eradications program, and regulation of in...