Objetivou-se avaliar a qualidade microbiológica, físico-química além da verificação da presença de resíduos de antibióticos em amostras de leite cru refrigerado coletadas em quatro tanques individuais e cinco coletivos localizados em propriedades rurais pertencentes ao município de Alegre/ES. As amostras foram codificadas, acondicionadas em frascos esterilizados e transportadas ao Laboratório de Microbiologia e Biotecnologia do Instituto Federal do Espírito Santo Ifes, Campus de Alegre/ES. Realizou-se análises microbiológicas para contagem bacteriana total e Staphylococcus aureus; físico-químicas; além da detecção de resíduos de antibióticos dos grupos β-lactâmicos e tetraciclinas. Os valores médios para CBT ficaram entre 2,0 x 104 UFC mL-1 e 3,0 x 107 UFC mL-1 e constatou-se que 44,44% das amostras encontravam-se em conformidade com a legislação. Os valores de S. aureus ficaram entre <102 e 3,6x106 UFC mL-1 e estes resultados são preocupantes devido à possibilidade de formação de toxinas termorresistentes, além de ser um microrganismo causador de mastite. Em relação às análises físico-químicas, 33,33% encontraram-se em conformidade com a legislação e em todas as amostras não foram constatados resíduos de antibióticos. Concluiu-se que apenas as amostras coletadas nos tanques de refrigeração individuais A6 e A7, se encontraram de acordo com a legislação vigente. São necessárias mudanças nas práticas de manejo adotadas para obtenção de leite com qualidade e inocuidade. A adoção dessas medidas permitiria a obtenção de leite com qualidade e inocuidade além de contribuir para a saúde dos consumidores e para a sustentabilidade do setor na região e no estado do Espírito Santo.