Estandarización de un protocolo para Northern blot no radioactivo usado en la detección de pequeños RNA en células Vero

Abstract

<p><strong>Título en ingles:</strong> <strong>Standardization of<em> Northern blot </em>non-radioactive protocol used in the detection of small RNAs in Vero line cells</strong></p><p>El interés en la detección, identificación, y caracterización funcional de los pequeños RNAs no codificantes (sRNAs), ha generado la necesidad de optimizar las metodologías comúnmente usadas en su detección, la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (RT-qPCR) y <em>Northern blot</em>, con el fin de que sean más sensibles y específicas. A pesar de la baja sensibilidad del <em>Northern blot</em>, esta metodología continúa siendo de uso común en la detección de sRNAs porque permite detectar el RNA pequeño así como a sus precursores, razón por la cual se usa como una metodología complementaria en este tipo de investigaciones. En este trabajo se describe la implementación de un nuevo protocolo para <em>Northern blot</em> no radioactivo, con modificaciones dirigidas a mejorar su sensibilidad y especificidad. El diseños de la sonda con la tecnología LNA, el marcaje de esta con Digoxigenina y por último la fijación del RNA a la membrana mediante 1-Ethyl-3-(-3-dimethylaminopropyl) carboniimide (EDC) y finalmente se discuten los fundamentos teóricos de estos cambios.</p>