Resumo Objetivo: identificar a situação vacinal e sorológica contra hepatite B entre agentes comunitários de saúde; vacinar contra o vírus da hepatite B e avaliar a resposta imunológica dos agentes susceptíveis. Método: fase I, estudo transversal e descritivo, entre agentes comunitários de saúde de uma capital da região Centro-oeste, por meio de questionário autoaplicável, conferência do cartão vacinal e coleta de sangue para testagem dos marcadores sorológicos para hepatite B. Fase II, estudo de coorte realizado em trabalhadores vacinados não imunes e identificados na fase I. Estes receberam uma dose da vacina (dose desafio) e teste sorológico. Resultados: participaram do estudo 109 agentes. A maioria tinha registro de vacinação (97; 89,0%) e completude vacinal (75; 77,3%), já o marcador anti-HBs (anticorpos contra o vírus da hepatite B) isolado foi detectado em 78 (71,6%) agentes. A prevalência de exposição ao vírus da hepatite B foi de 8,2%. Dos dez agentes vacinados não imunes, após a dose desafio, um permaneceu susceptível. Conclusão: apesar da maioria dos trabalhadores estarem vacinados e apresentarem resposta imunológica para hepatite B, a suscetibilidade após a dose desafio foi identificada. Portanto, é necessário que haja um programa de vigilância da situação vacinal e estado sorológico para este vírus, para promover a segurança destes trabalhadores.