Evaluación de una técnica capilar modificada para inmunocitoquímica en cultivos adheridos a cubre objetos de vidrio

Abstract

ResumenCon el objeto de evaluar una técnica inmunocitoquímica para cultivos celulares adheridos a cubreobjetos, se ensayó una modificación de la técnica capilar comparándola con la técnica convencional (en cajas de 24 pozos). Cultivos de ganglio de raíz dorsal de ratón adulto se sometieron a inmunodetección por peroxidasa e inmunofluorescencia de neurofilamento, proteína 5-100 y virus de la rabia; la especificidad e intensidad de la marca con una u otra técnica no cambió. El uso de la técnica capilar modificada significó un ahorro de 92% en los volúmenes de anticuerpos y reactivos usados, sin sacrificar los patrones de marca, sin incrementar el tiempo del procedimiento y usando materiales que corrientemente se encuentran en cualquier laboratorio.Palabras clave: inmunocitoquímica, técnica capilar, cultivo de neuronas, anticuerpos. Evaluation of a modified capillary technique for immunocytochemistry of coverslip adhered cultures AbstractIn order to evaluate a simple and easy immunocytochemical method for cultured cell monolayers adhered to coverslips, we compared a minichamber technique with the conventional method using 24 well culture plates. lmmunocytochemical procedures were carried out on adult mice dorsal root ganglia cultures for fluorescence and peroxidase detection of neurofilament, S-100 protein or rabies virus. lntensity and especificity were similar using both techniques. Primary and secondary antibodies and enzymes volumes saving was 92% with similar reactivity and no increase in processing time of samples. This tecnique only requires materials routinely found in the labratory.Key words: immunocytochemistry, capillary technique, neuron culture, antibody. Introducción y reactivos de inmunocitoquímica, es necesarioEn la realización de la mayoría de las técnicas buscar técnicas alternativas que permitan inmunocitoquímicas se requieren volúmenes optimizar el uso de los reactivos biológicos y relativamente arandes de soluciones de reducir los costos sin sacrificar los resultados.incubación, ya sea anticuerpo primario, El principio básico de estas modificaciones es la secundario o complejos enzimáticos, para que capilaridad, la cual permite que la muestra entre la muestra quede totalmente cubierta. Debido al en contacto con mínimos volúmenes de la alto costo y a la escasez de algunos anticuerpos solución de incubación. Con este fin, varios