Leishmania é um protozoário parasito causador de importantes doenças zoonóticas, conhecidas como leishmanioses. A principal forma de transmissão desse parasito é por meio da picada de insetos flebotomíneos infectados. Contudo, outras formas de transmissão têm sido estudadas, como a infecção vertical e venérea, relatadas anteriormente em seres humanos e cães. Sabendo-se que os gatos também são reservatórios do parasito, capazes de transmitir Leishmania ao vetor e participando na manutenção de seu ciclo e que a infecção por Leishmania spp. já foi relatada em diversos tecidos de gatos, se faz relevante a investigação da possibilidade da transmissão vertical e venérea nessas espécies. O presente estudo verificou a presença de DNA do parasito Leishmania no sistema reprodutor de gatos advindos de uma região endêmica para leishmaniose visceral. Um total de 302 gatos tiveram o suabe conjuntival coletado e a presença de DNA de Leishmania avaliada nessas amostras. Desses 302, 40 eram de um estudo anterior e passaram por exames sorológicos, PCR de suabe conjuntival e sangue. O sistema reprodutor de 41 gatos machos e fêmeas foi avaliado e o DNA de Leishmania spp. foi detectado em três deles, sendo os órgãos positivos o testículo, epidídimo, ovário e útero. O sequenciamento genético de duas amostras confirmou que em dois casos a espécie infectante era Leishmania infantum. Essa descoberta reforça a preocupação com infecções verticais e venéreas por esse parasito, nessa espécie de hospedeiro.