In this study the protein and mRNA expression of Monocarboxylate transporter 1 (MCT1) was evaluated in rumen epithelial cells (REC) obtained from sheep fed hay ad libitum (control, h diet, n=4) or a mixed hay/concentrate diet (h/c diet, n=4) for two weeks. REC were isolated via fractionated trypsination and three groups consisting of fractions 3 to 5=G1, fractions 6 to 8=G2, and fractions 9 and 10=G3 were formed. Using an anti-basal cytokeratin antibody and flow cytometric analysis, the proportion of REC originating from the stratum basale (SB) was determined for each group. In addition, MCT1 mRNA and protein expression was determined by qRT-PCR and Western blot, respectively. Feeding the h/c diet led to a 299±93 % elevation of the number of SB cells known to express the MCT1 protein. This is accompanied by an increased MCT1 mRNA (1.8 to 2.2-fold) and protein (1.3-fold) expression. Thus, an increased number of MCT1 expressing cells and upregulation of ruminal MCT1 protein seem to be components of rumen epithelium functional adaptation to high energy diet.Keywords: sheep, rumen, epithelial cells, transport protein, high energy diet
Zusammenfassung
Die mRNA-und Protein-Expression des MCT1 in Pansenepithelzellen wird durch Zufütterung von Konzentrat zu einer ad libitum Heu-Ration erhöhtIn der vorliegenden Studie wurden die mRNA-und Proteinexpression des Monocarboxylattransporters 1 (MCT1) in Pansenepithelzellen (PEZ) von Schafen, die über zwei Wochen entweder Heu ad libitum (h-Diät, n=4) oder eine Heu/Konzentrat-Mischration (h/c-Diät, n=4) erhielten, untersucht. Ovine PEZ wurden mittels fraktionierter Trypsinierung gewonnen und anschließend drei Zellgruppen, bestehend aus den Fraktionen 3-5 (G1), 6-8 (G2) und 9/10 (G3), zugeordnet. Mittels Flowzytometrie und unter Nutzung eines spezifischen Antikörpers gegen basales Cytokeratin wurde der Anteil von PEZ aus dem Stratum basale (SB) für jede Zellgruppe ermittelt. Die Expression von MCT1-mRNA und -Protein wurde mittels qRT-PCR und Western Blot analysiert. Die Anzahl MCT1-exprimierender SB-Zellen, stieg nach Füt-terung der h/c-Diät um 299±93 %. Damit ist eine Erhöhung der MCT1-mRNA-(1,8-2,2-fach) sowie der Proteinexpression (1,3-fach) verbunden. Ein erhöhter Anteil MCT1-expremierender PEZ und die Aufregulation der MCT1 Proteinmenge scheinen somit Komponenten der funktionellen Anpassung des Pansenepithels an energiereiche Fütterung darzustellen.