Espécie endêmica do Nordeste brasileiro, o Melocactus zehntneri tem importante valor medicinal, sendo também explorada para uso ornamental. O cultivo in vitro de plantas apresenta inúmeras vantagens frente às técnicas comumente utilizadas, apesar do elevado custo de manutenção. Buscando alternativas de minimizar tais custos, o presente trabalho objetivou avaliar o crescimento in vitro e ex vitro de M. zehntneri com o uso de diferentes fontes de luz e de esterilização do meio de cultura. Para a germinação in vitro e crescimento inicial das plântulas, foi utilizado meio de cultura simplificado, o qual foi esterilizado fisicamente por autoclavagem (EF), ou quimicamente (EQ) pela adição de hipoclorito de cálcio (0,01%). Os cultivos foram mantidos sob fontes de luz fluorescente - FL e Diodo Emissor de Luz – LED, durante 200 dias. Posteriormente, as plantas foram aclimatizadas em casa de vegetação, onde permaneceram por 130 dias. Ao final da fase in vitro foi avaliado o percentual de germinação, ocorrência de contaminação, os parâmetros de crescimento e os teores de pigmentos fotossintéticos. Estas duas últimas variáveis também foram examinadas após a etapa ex vitro, além da taxa de sobrevivência das plantas. O uso de LEDs apenas antecipou o início da germinação, não diferindo de FL quanto ao percentual. Na fase in vitro, o tratamento LED + EF apresentou maior crescimento. Os grupos tratados com LED influenciaram positivamente a biossíntese dos pigmentos. O tratamento LED + EQ produziu menores teores de carotenoides do que LED + EF. No ambiente ex vitro, a taxa de sobrevivência das plantas foi de 100% e aquelas provenientes dos tratamentos expostos aos LEDs apresentaram melhor desenvolvimento. Para o teor de pigmentos, o tratamento com LED aumentou o conteúdo de carotenoides. Os resultados evidenciam que a qualidade da luz interfere de modo positivo no crescimento de M. zehntneri de forma mais evidente que o tipo de esterilização do meio de cultura. Desse modo, recomenda-se o uso da combinação de fatores LED + EQ, os quais propiciaram a obtenção de plantas de melhor qualidade, além de permitirem a redução de custos.