Introducción: la aspergilosis es una micosis oportunista con gran impacto en pacientes Inmunodeprimidos; los datos disponibles en Paraguay son escasos. Objetivos: caracterizar a los pacientes con diagnóstico de aspergilosis cuyas muestras fueron enviadas a la sección de Micología del Laboratorio Central de Salud Pública en el período 2000-2019. Materiales y métodos: estudio descriptivo y retrospectivo de fichas de pacientes con muestras positivas del género Aspergillus. Resultados: se encontraron 54 pacientes con diagnóstico de aspergilosis: Otomicosis 21 (38,9 %), aspergilosis pulmonar crónica 17 (31,5 %), sinusitis aguda y crónica 5 (9,2 %), aspergilosis invasiva 4 (7,4 %), onicomicosis 3 (5,6 %), aspergilosis broncopulmonar alérgica 2 (3,7 %) y queratitis 2 (3,7 %). Los aislamientos fueron 56: Aspergillus sección Fumigati 26 (46,4 %), A. sección Flavi 15 (26,8 %), A. sección Nigri 13 (23,2 %), A. sección Terrei 1 (1,8 %) y Aspergillus glaucus 1 (1,8 %). Los métodos de diagnóstico microbiológico fueron el examen en fresco, coloraciones, cultivo y serología. Conclusiones: en un período de 20 años varios casos de aspergilosis fueron informados. La otomicosis con predominio en adultos fue la forma de aspergilosis prevalente. En las formas crónicas rino-pulmonares la tuberculosis, tumores, enfermedad obstructiva crónica, fibrosis quísticas y asma fueron los factores predisponentes. La aspergilosis invasiva fue de preferencia en pediatría donde las enfermedades autoimunes y leucemias fueron los factores de riesgo. Aspergillus sección Fumigati fue prevalente del total de aislamientos seguido de Aspergillus sección Flavi y Aspergillus sección Nigri.