Geração de célulastronco/progenitoras hematopoéticas e progenitores eritroides a partir de células-tronco de pluripotência induzida derivadas de pacientes com anemia falciforme

Abstract

AGRADECIMENTOSAos meus pais, Rita e João Roberto, e meu irmão, Rodrigo, por me darem o exemplo de dedicação e trabalho, e o suporte e incentivo para a realização dos meus objetivos.Ao Pablo pelo companheirismo e por estar presente em todos os momentos, sejam eles de vitórias ou de superação das derrotas. À professora Virgínia Picanço e Castro pela oportunidade, confiança e orientação no desenvolvimento deste trabalho.Aos colegas do pela convivência e ajuda na realização deste trabalho. Em especial à Luiza por tudo que me ensinou, pelo auxílio no desenvolvimento teórico e prático deste trabalho.A todos os pesquisadores, alunos e funcionários do Hemocentro. Em especial à Patrícia Bonini e Camila Menezes pelo auxílio na elaboração de experimentos e análises por citometria de fluxo, e à Carmen Simão por estar sempre disposta a ajudar. À Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto pelo conhecimento científico adquirido ao longo do curso de pós-graduação. À secretaria do programa pela ajuda com os assuntos burocráticos relacionados ao programa. À FAPESP (Processo número 2016/08373-9) pelo auxílio financeiro e incentivo à pesquisa.Aos membros da banca por se disponibilizarem a avaliar este trabalho. E a todos que não nomeei, mas estiveram envolvidos direta ou indiretamente no desenvolvimento deste trabalho. Palavras-chave: Diferenciação hematopoética. iPSC. Diferenciação eritroide. In vitro. Anemia falciforme. ABSTRACT PAES, Bárbara Cristina Martins Fernandes. Generation of hematopoietic stem/progenitor cells and erythroid progenitor cells from induced pluripotent stem cells derived from patients with sickle cell anemia. 2018. 111 f. Dissertação (Mestrado em Oncologia Clínica, Células-Tronco e Terapia Celular) -Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018.Induced pluripotent stem cells (iPSC) are cells generated by reprogramming somatic cells, they have the potential for differentiation into all types of cells in the adult organism. The differentiation of patient-specific iPSC into hematopoietic cells is a way of studying hematopoiesis in disease models, such as sickle cell anemia, and is also essential for the development of therapies. The present study proposed the generation of hematopoietic stem/progenitor cells and erythroid progenitors from iPSC derived from patients with sickle cell anemia. Throughout the differentiation, hematopoietic and erythroid developments were monitored by colony forming cell assay and immunophenotypic analysis. In this study, we generated cells with characteristics of hematopoietic stem/progenitor cells, of CD34 + CD45 + and CD45 + CD43 + phenotypes, erythroid progenitors (CD36 + , CD71 + and CD235a + ), as well as the formation of hematopoietic colonies in culture in semi-solid medium. The iPSC line PBscd08 demonstrated greater potential for differentiation into hematopoietic and erythroid cells than the other cell lines evaluated. The iPSC line PBscd01, also generated from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from patients with sickle cell an...

O switching de globinas na diferenciação hematopoética in vitro

“…maior número amostral de doadores(VINJAMUR;BAUER;ORKIN, 2018).Uma alternativa ao uso de tais células é o uso de células-tronco de pluripotência induzida (iPSC), uma vez que podem ser propagadas irrestritamente e diferenciadas in vitro. Apesar disso, essas células são dificilmente diferenciadas e há o predomínio da expressão de globinas embrionárias e fetais(CATELLI, 2017;CUNHA et al, 2017;PAES, 2019;TRAKARNSANGA et al, 2017). além de ser uma abordagem para analisar a reprodutibilidade de experimentos de diferenciação hematopoética e eritroide ex vivo.Esse estudo criou uma ferramenta para monitorar a diferenciação hematopoética in vitro, podendo ser utilizada para a criação de protocolos de diferenciação mais eficientes, robustos e reprodutíveis.…”