Geração de linhagens celulares HEK293 knockdown para as proteínas p53, ATM, mTOR e PGC1α e estudo do papel de p53 na resposta ao estresse oxidativo provocado por azul de metileno

Abstract

Geração de linhagens celulares HEK293 knockdown para as proteínas p53, ATM, mTOR e PGC1α e estudo do papel de p53 na resposta ao estresse oxidativo provocado por azul de metileno AgradecimentosAgradeço a minha orientadora, profa. Nadja C. de Souza Pinto, pela orientação, dedicação e pela oportunidade de me juntar ao seu grupo para desenvolver meu trabalho. Agradeço também pela oportunidade de conhecer outros pesquisadores, com os quais mantêm contato, e por estimular e apoiar a participação em congressos e, em especial ao 11 th ICEM, do qual fez parte da comissão organizadora.A minha co-orientadora, Daniela T. Soltys, por todo o apoio que me deu ao longo do mestrado, pelo incentivo a buscar novas abordagens para o desenvolvimento do meu trabalho e também pelo carinho e amizade.A profa. Alicia J. Kowaltowski, por permitir o uso irrestrito do seu laboratório e por reforçar meu interesse por mitocôndrias. Agradeço também a todos os integrantes do seu grupo de pesquisa, pelas valiosas discussões, auxílio técnico e pela amizade.Ao prof. Carlos F. Menck, pelo uso de equipamentos e materiais necessários para desenvolver parte dos meus experimentos. Aos integrantes do seu laboratório, pela disposição em ajudar.A Andressa Costa e Adriana Wendel, pela excelente organização do laboratório e pela dedicação.A todos os membros do Laboratório de Genética Mitocondrial, antigos e atuais, pelos trabalhos desenvolvidos, pelo companheirismo e bom humor. Sobretudo, agradeço a amizade de cada um de vocês.A minha família e aos meus amigos, pelo imenso apoio e incentivo.Ao Instituto de Química e à Universidade de São Paulo, por sempre prezarem pela excelência no ensino e na pesquisa.Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), a Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e a Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), pelo auxílio financeiro: Redoxoma (08/57721-3) e projeto temático (10/51906-1). Novamente, ao CNPq pela bolsa de mestrado (processo 13326/2010-2). ResumoDias, G.C. Geração de linhagens celulares HEK293 knockdown para as proteínas p53, ATM, mTOR e PGC1α e estudo do papel de p53 na resposta ao estresse oxidativo provocado por azul de metileno. 2013. (66p). Dissertação -Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas (Bioquímica). Instituto de Química, Universidade de São Paulo, São Paulo.O DNA é um alvo constante de modificações químicas, as quais resultam na ativação dos programas de reparo de danos no DNA. O DNA mitocondrial (DNAmt), uma molécula circular contendo aproximadamente 16,6 kb de extensão, é constantemente exposto às espécies reativas de oxigênio (EROs) devido a sua proximidade da cadeia transportadora de elétrons, presente na membrana mitocondrial interna. Quase todas as vias de reparo de DNA presentes no núcleo atuam também na mitocôndria, entretanto, a regulação das vias mitocondriais não é bem compreendida. As proteínas p53, ATM, mTOR e PGC1α participam, dentre outros papéis, do controle do metabolismo energético e das respostas a le...

Efeito da proteína p53 nas respostas celulares à terapia fotodinâmica com 1,9-dimetil azul de metileno

“…As linhagens HEK293T scrambre e knockdown para p53 foram geradas por meio da transfecção de células HEK293T com plasmídeos pGFP-V-RS (Dias, 2014). Esse plasmídeo expressa um short-harpin RNA (shRNA) de sequência aleatória, que funciona como controle negativo da transfecção (linhagem scramble) ou um shRNA com sequência específica para o silenciamento de p53 (linhagem knockdown).…”