IDENTIFIKASI BAKTERI PORPHYROMONAS ENDODONTALIS PADA INFEKSI SALURAN AKAR MELALUI ANALISIS GEN 16S rRNA

Abstract

Latar belakang: bakteri Porphyromonas endodontalis merupakan bakteri batang, pigmen hitam Gram-negatif yang kehadirannya dalam saluran akar umumnya dikaitkan dengan periodontitis, gingivitis, dan nekrosis pulpa. Bakteribakteri pigmen hitam umumnya sulit didapat dengan metode kulturisasi konvensional dikarenakan kulturisasi dengan kondisi anaerob obligat sangat memakan waktu dan memerlukan kondisi kultur yang rumit. Metode analisis gen 16S rRNA merupakan metode yang digunakan untuk mendeteksi dan mengidentifikasi bakteri pathogen pada specimen klinis dengan cara menduplikasi DNA dan mengidentifikasi DNA bakteri target. Tujuan: penelitian ini merupakan penelitian deskriptif yang bertujuan untuk mengidentifikasi bakteri Porphyromonas endodontalis pada saluran akar terinfeksi secara in vitro dengan menggunakan metode analisis gen 16s rRNA. Metode: spesimen sampel didapat dari pasien RSGM Universitas Trisakti Jakarta yang melakukan perawatan saluran akar dengan diagnosis nekrosis pulpa. Spesimen koloni bakteri yang dicurigai sebagai bakteri pigmen hitam Gram-negatif anaerob disubkultur hingga ditemukan koloni bakteri murni yang berwarna hitam kehijauan atau kecoklatan. Setelah itu diidentifikasi dengan menggunakan polymerase chain reaction (PCR), pengecatan Gram, morfologi koloni dan mikroskopik. Identifikasi PCR dengan kontrol menggunakan bakteri Porphyromonas endodontalis strain ATCC® 35406D-5TM dan primer forward ( 5’-GCT-GCA-GCT-CAA-CTGTAG-TCT-TG-3’) serta primer reverse Porphyromonas endodontalis (5’-TCA-GTG-TCA-GAC-GGA-GCC-TAGTAC-3’). Hasil: hasil amplifikasi divisualisasikan melalui UV-Transluminator. Pemeriksaan elektroforesis DNA pada sampel memperlihatkan pita yang berada sangat mendekati nilai 500 bp yang diduga merupakan bakteri Porphyromonas endodontalis pada saluran akar. Kesimpulan: hasil penelitian memperlihatkan terdapat bakteri Porphyromonas endodontalis di dalam saluran akar spesimen sampel. Metode PCR yang mentargetkan gen 16S rRNA merupakan cara yang efektif dan efisien dalam mengidentifikasi bakteri yang sulit untuk didapatkan melalui metode kulturisasi seperti bakteri pigmen hitam Porphyromonas endodontalis.