Introducción: Uno de los mecanismos de resistencia en Gram negativos es la producción de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE), capaces de otorgar resistencia a penicilinas y cefalosporinas. Objetivo. Determinar la prevalencia de β-lactamasas de amplio espectro en aislamientos de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae identificados en una institución de salud. Metodología: Se tomaron los resultados del laboratorio clínico de los pacientes hospitalizados por enfermedades infecciosas identificados en un hospital de 4º nivel de complejidad en Barranquilla durante el año 2018 asociados a E. coli y K. pneumoniae, y se evaluó la resistencia de los mismos. Resultados: De 471 aislamientos identificados en diversas muestras clínicas, 317 están asociados a E. coli, y para ambos microorganismos presentaron mayores porcentajes de resistencias al tratamiento antibiótico en áreas no UCI, y evidenciando una resistencia a fármacos como ampicilina y cefalotina, por debajo de 60%, y 75%, respectivamente. Conclusión: Estas bacterias evaluadas, al ser de mayor relevancia clínica, pueden lograr un impacto no deseado por su presencia en áreas no UCI, siendo crítico para E. coli con resistencia a cefalosporinas de tercera y cuarta generación.