Importance of Particle Pore Size in Determining Retention and Selectivity in Reversed Phase Liquid Chromatography

Godinho, Justin M.; Naese, Joseph A.; Toler, Alexander E.; Boyes, Barry E.; Henry, Ronald J. W.; DeStefano, Joseph; Grinias, James P.

doi:10.1016/j.chroma.2020.461678

Cited by 14 publications

(3 citation statements)

References 23 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…However, the accessibility of the surface area in the pores diminishes with the hydrodynamic diameter of molecules (see the section Hydrodynamic Diameter). For instance, insulin ( M w = 5777 Da) was shown to have access to only 40% of the surface area in particles with a pore size of 90 Å . Consequently, peptides generally utilize a greater surface area of particles with larger pores, even though they have an intrinsically lower surface area, than if separated using particles with the large surface area provided by small pores. , In addition, if the pore size is not selected adequately to the analyte size, a secondary size-exclusion effect burdens the separation, further aggravating the peak shape (Figure ).…”

Section: Rplc Methods For Bottom-up Proteomic Analysesmentioning

confidence: 99%

Reversed-Phase Liquid Chromatography of Peptides for Bottom-Up Proteomics: A Tutorial

et al. 2022

View full text Add to dashboard Cite

The performance of the current bottom-up liquid chromatography hyphenated with mass spectrometry (LC-MS) analyses has undoubtedly been fueled by spectacular progress in mass spectrometry. It is thus not surprising that the MS instrument attracts the most attention during LC-MS method development, whereas optimizing conditions for peptide separation using reversed-phase liquid chromatography (RPLC) remains somewhat in its shadow. Consequently, the wisdom of the fundaments of chromatography is slowly vanishing from some laboratories. However, the full potential of advanced MS instruments cannot be achieved without highly efficient RPLC. This is impossible to attain without understanding fundamental processes in the chromatographic system and the properties of peptides important for their chromatographic behavior. We wrote this tutorial intending to give practitioners an overview of critical aspects of peptide separation using RPLC to facilitate setting the LC parameters so that they can leverage the full capabilities of their MS instruments. After briefly introducing the gradient separation of peptides, we discuss their properties that affect the quality of LC-MS chromatograms the most. Next, we address the in-column and extra-column broadening. The last section is devoted to key parameters of LC-MS methods. We also extracted trends in practice from recent bottom-up proteomics studies and correlated them with the current knowledge on peptide RPLC separation.

show abstract

Section: Rplc Methods For Bottom-up Proteomic Analysesmentioning

confidence: 99%

Reversed-Phase Liquid Chromatography of Peptides for Bottom-Up Proteomics: A Tutorial

et al. 2022

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Отметим, что, строго говоря, полученные различия могут быть связанными не только с различием фазовых соотношений, но и с различием констант распределения каротиноидов несмотря на химически одинаковый тип привитой фазы. В этом отношении интерес представляет сопоставление энтальпий переноса каротиноидов с подвижной фазы на стационарную, которую определяли обычным методом, исследуя зависимость натуральных логарифмов факторов удерживания от обратной абсолютной температуры [14]: (5) При исследовании в диапазоне температур 20-50 о С были получены линейные зависимости по уравнению (5)…”

Section: экспериментальная частьunclassified

“…Размер и объем пор сорбента определяют удерживание в гельэксклюзионной хроматографии [1,2], предназначенной для разделения олигоили полимерных соединений различных классов, а также и в мицеллярной хроматографии [3]. Для традиционной ВЭЖХ мономерных соединений влияние этого параметра также не исключается [4], хо-тя исследований влияния этой характеристики сорбента на удерживание аналитов при одинаковом химическом составе поверхности сорбента немного [5]. Известно утверждение о том, что при превышении размера молекулы сорбата 10% размера пор сорбента возможны проблемы с удерживанием сорбата [6] из-за потери свободы движения, что замедляет достижение равновесия, приводящее к падению удерживания и эффективности разделения.…”

Section: Introductionunclassified

Влияние Размера Пор Сорбента Марки Кромасил На Удерживание Каротиноидов В Обращенно-Фазовой ВЭЖХ

Дейнека¹,

Староверов²,

Васияров³

et al. 2022

sorpchrom

View full text Add to dashboard Cite

Исследована зависимость удерживания трех тестовых аналитов – ликопина (I), β-каротина (II) и дипальмитата зеаксантина (III), – от размера пор трех сорбентов с одинаковым химическим составом привитых алкильных (С16) групп и сопоставлены методы оценки влияния размера пор на удерживание. Выбор тестовых соединений был выполнен так, чтобы в одной из пар линейные размеры молекул были близкими (для I и II), а для любого из этих веществ по сравнению с третьим компонентом (например, для III и II) различие в размерах было бы значительным. При росте размера пор (от 80 до 160 Å) уменьшалась удельная поверхность сорбентов, поэтому и удерживание аналитов при одном и том же составе подвижной фазы заметно уменьшалось. Но по относительному удерживанию для каротинов (I и II) с близкими размерами молекул различий между логарифмами факторов удерживания практически нет. При этом для III удерживание возрастает с ростом диаметра пор сорбентов, что соответствовало известной гипотезе о том, что с ростом размера пор удерживание соединений, размеры которых превосходят 10% размера пор, должно возрастать. Однако при корректном анализе изменения удерживания при смене стационарных фаз следует учитывать изменения фазового соотношения колонок. В работе предложены два варианта сопоставления, при которых учитываются различия в фазовых соотношениях. По первому варианту сопоставляются логарифмы факторов удерживания выбранных аналитов на одной из колонок относительно аналогичных параметров для колонки сравнения. Во втором случае сопоставляются инкременты – изменения логарифмов факторов удерживания для переходов от II к I и II к III в нескольких составах подвижный фаз для различных колонок. В обоих вариантах при смене стационарных фаз для ликопина и β-каротина зависимость констант распределения от размера пор практически отсутствует, но для диэфира зеаксантина наблюдается уменьшение этого параметра, подтверждаемое анализом термодинамических параметров переноса аналитов с подвижной фазы на стационарную.

show abstract

Effect of the type of commercially available mixed-mode stationary phases on the retention of pharmaceutically important acidic and neutral compounds using different compositions of mobile phase

Grybinik

Bosáková

2022

Monatsh Chem

View full text Add to dashboard Cite

Importance of Particle Pore Size in Determining Retention and Selectivity in Reversed Phase Liquid Chromatography

Cited by 14 publications

References 23 publications

Reversed-Phase Liquid Chromatography of Peptides for Bottom-Up Proteomics: A Tutorial

Reversed-Phase Liquid Chromatography of Peptides for Bottom-Up Proteomics: A Tutorial

Влияние Размера Пор Сорбента Марки Кромасил На Удерживание Каротиноидов В Обращенно-Фазовой ВЭЖХ

Effect of the type of commercially available mixed-mode stationary phases on the retention of pharmaceutically important acidic and neutral compounds using different compositions of mobile phase

Contact Info

Product

Resources

About