Influence of oxygen tension on CD133 phenotype in human glioma cell cultures

“…However, in the primary GBM cells the mRNA levels were substantial, indicating that low protein level may be due to a possible translational and/or posttranslational control. Culture conditions, including exposure to serum, have been hypothesized to affect CD133 expression or glycosylation (19). This could potentially explain why our primary GBM lines had less CD133 glycosylation-positive cells than others have reported.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 80%

“…The conflicting evidence casts doubt on CD133 as a cancer stem cell marker. CD133 has been analyzed via several methods including Western blot analysis, immunomagnetic (MACS), and fluorescence-activated cell sorting (FACS) (1,18,19), however the vast majority of CD133 research is carried out using the AC133 monoclonal antibody, and to a lesser extent the 293C monoclonal antibody (2,(4)(5)(6)12), both of which detect glycosylated epitopes of CD133. Recent research (20) has shown that these antibodies are not specific for a glycosylated epitope, and that AC133 can detect protein with mutated glycosylation sites, as well as non-glycosylated recombinant CD133 protein.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Glioblastoma cells negative for the anti-CD133 antibody AC133 express a truncated variant of the CD133 protein

Osmond

Broadley²,

McConnell³

2010

Int J Mol Med

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Abstract. The transmembrane glycoprotein CD133 is a marker commonly used for isolation and analysis of putative cancer stem-like cells. However, analysis of CD133 expression is potentially confounded by the fact that two of the commonly used anti-CD133 antibodies, AC133 and 293C, only recognize CD133 that has undergone glycosylation. Therefore, our aim was to thoroughly examine antibody recognition and mRNA expression of CD133 in glioblastoma multiforme. Glioblastoma cell lines and primary cultures obtained from resected tumor tissue were analyzed by real-time PCR, Western blot analysis, and flow cytometry for CD133, and immunofluorescence was used to determine cellular localization. The AC133 and 293C antibodies did not detect any CD133 on the surface of the glioblastoma cells despite the fact that a protein was detected using C24B9, an anti-CD133 antibody that recognizes an unglycosylated epitope. This CD133 variant was truncated (~16 kDa) and, unlike typical expression of full-length CD133 protein, was found throughout the cytoplasm instead of localized to the plasma membrane. Levels of mRNA and protein for the variant increased with stress, indicating potential for it to be a functional molecule. Because AC133 and 293C antibodies do not detect all CD133 variants in glioblastoma cells, alternate detection methods need to be utilized for complete analysis of CD133 expression and for accurately determining the relationship between CD133 and cancer stem-like cells.

show abstract

“…C'est ainsi que les conditions de culture « classiques » (20 % O 2 ) apparaissent aujourd'hui préjudiciables au maintien des cellules souches qui requiert un pourcentage proche de 1-3 % [2,[11][12][13]. Par ailleurs, dans le cas des tumeurs gliales du cerveau (glioblastomes), la diminution de la pO 2 favorise le maintien de la population exprimant la protéine CD133 en culture [14] -population à laquelle on attribue selon certaines publications un rôle critique en terme de tumorigéni-cité [15].…”

Section: Normoxie Expérimentale En Culture = Hyperoxie Physiologiqueunclassified

Pression partielle en oxygène et culture de cellules cancéreuses

et al. 2008

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Normoxie expérimentale en culture = hyperoxie physiologiqueActuellement, les cultures cellulaires effectuées dans des incubateurs « classiques » sous 5 % de CO 2 se font sous la pression atmosphérique d'O 2 , qui est d'environ 160 mm Hg (≈21 % O 2 ). Cette pO 2 dite « atmosphérique » est toutefois légèrement inférieure dans les incubateurs de culture cellulaire dont l'atmosphère présente une hygrométrie élevée et contient 5 % de CO 2 . Or in vivo, la pression partielle en oxygène dans les tissus n'atteint jamais une telle valeur. Ainsi, la pO 2 du sang artériel est de 95 ± 5 mmHg, celle du sang veineux est d'environ 40 mmHg, et cette pression varie entre 6 et 34 mmHg (1-5 % O 2 ) au niveau de la plupart des tissus [1,2]. Le mode de culture in vitro des cellules issues de tissus humains impose donc de ce fait une « hyperoxie » artificielle aux conséquences très imparfaitement contrô-lées. Ce problème posé par la pO 2 des cultures cellulaires est probablement encore plus crucial dans le cas spécifique des cellules tumorales dont on sait qu'elles sont confrontées in vivo à des conditions hypoxiques, du fait d'une masse tumorale exagérée et d'une vascularisation souvent insuffisante en dépit du phénomène d'angiogenèse. Ainsi, la « normoxie » expérimentale des cultures de cellules tumorales, qui correspond aux conditions de culture cellulaire classiques définies il y a près d'un siècle à une époque où les pressions partielles en O 2 des tissus commençaient juste à être étudiées, est en fait une condition d'hyperoxie. En d'autres termes, la « normoxie » expérimentale ou « culturelle » de nos milieux de culture correspond à une « hyperoxie » physiologique. Le manque de vigilance fréquent vis-à-vis de ce phénomène vient probablement du fait que les cellules normales ou tumorales survivent et sont capables de croître même sous la pression atmosphé-rique de 21 % de O 2 (pO 2 ≈160 mmHg). Néanmoins, ces conditions « hyperoxiques » ne sont pas dépourvues de conséquences et altèrent très probablement de manière négative la physiologie cellulaire. Pour preuve l'observation faite dès 1972 mentionnant que la diminution de

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Influence of oxygen tension on CD133 phenotype in human glioma cell cultures

Cited by 147 publications

References 18 publications

The effect of neurosphere culture conditions on the cellular metabolism of glioma cells

The effect of neurosphere culture conditions on the cellular metabolism of glioma cells

Glioblastoma cells negative for the anti-CD133 antibody AC133 express a truncated variant of the CD133 protein

Pression partielle en oxygène et culture de cellules cancéreuses

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