Investigação molecular de arbovírus em líquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes pediátricos com indícios de neuroinfecção

Abstract

À Deus e minha família pelo amor incondicional e pelo apoio presente nessa jornada. À Prof a . Dra. Sandra Helena Alves Bonon por todas as orientações, ensinamentos e incentivo transmitidos ao longo do desenvolvimento deste trabalho pela contribuição no meu crescimento acadêmica e profissional.Ao Laboratório de Líquidos Biológicos do HC/UNICAMP por cederem as amostras biológicas usadas para realização deste estudo.Ao Laboratório de Virologia da Faculdade de Ciências Médicas/UNICAMP por todo suporte na realização de cada experimento, a todos os seus integrantes pela acolhida e contribuições.Aos meus amigos do mestrado, alunos de doutorado e funcionários pela convivência, companheirismo e incentivo.A todos aqueles que contribuíram, direta ou indiretamente, para a construção e conclusão deste trabalho. AGRADECIMENTOSÀ Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), que financiou a pesquisa que deu origem ao trabalho, "processo nº 2016/17031-4, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)"."O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior -Brasil (CAPES) -Código de Financiamento 001". RESUMOObjetivos: Investigar a presença de genomas de arbovírus transmitidos pelo Aedes spp, através de testes de biologia molecular a partir de líquido cefalorraquidiano (LCR) de crianças com suspeita de infecção no sistema nervoso, e associar os resultados com os sinais e sintomas de disfunção neurológica e/ou sistêmica e resultado dos exames bioquímicos, microbiológicos e citológicos no LCR.Métodos: Este estudo transversal incluiu 184 amostras de LCR de crianças de 1 (um) dia de vida a 18 anos de idade (mediana de 2,2 anos) com testes microbiológicos negativos, atendidas em um hospital universitário e com suspeita de infecção viral no sistema nervoso. Foi coletado por punção o LCR dos pacientes e extraído o RNA. Foram utilizadas técnicas de biologia molecular RT-Nested-PCR e RT-qPCR para identificação de genomas dos arbovírus das famílias Togaviridae (Alfavírus), Flaviviridae (Flavivírus) e Bunyaviridae, e os resultados foram analisados de acordo com os achados clínicos.Resultados: Do total de 184 crianças incluídas, 57% eram do sexo masculino.Usando os testes moleculares, foi identificada a prevalência do genoma dos vírus Dengue e Zika em 23,9% (44/184) das amostras de LCR, sendo que em 59% (26/44) era pelo vírus Dengue e 38,6% (17/44) pelo vírus Zika. Uma amostra apresentou coinfecção Dengue+Zika (2,3%). Destes pacientes com LCRpositivo, 16/67 (23,9%) tinham suspeita de infecção/sepse, 3/26 (11,5%) meningite; 5/22 (22,7%) hidrocefalia; 5/20 (25%) convulsão e 1/4 (25%) encefalite; 3/5 (60%) tiveram hipertensão intracraniana (HIC); 1/3 (33,3%) cada, dos casos de neurite e meningoencefalite; 3/8 (37,5%) em outros e 2/2 dos casos de rebaixamento do nível de consciência, síndrome de Guillain-Barré e arbovirose/zika, cada. Os resultados microbiológicos no LCR foram negativos.Pleocitose no LCR ocorreu em 25% dos casos positivos e o uso de antibióticos...