Investigation of extracellular protease activity of two different extremely halophilic archaea isolated from raw hide

Abstract

ABSTRACT. In this study, it was aimed to inves% gate extracellular protease ac% vity of two diff erent extremely halophilic archaea and to iden% fy them by using phenotypic and molecular methods. The haloarchaea were isolated from salted raw hide. The isolates were screened for produc% on of protease enzyme and two isolates which have extracellular protease ac% vity were selected. To iden% fy the halophilic archaea, Gram staining procedure, an% bio% c sensi% vity tests and molecular methods were used. According to the 16S r-RNA molecular iden% fi ca% on results, isolate 1 iden% fi ed as Halococcus morrhuae JCM 8876 with % 99 sequence similari% es and isolate 2 iden% fi ed as Natrinema pallidum 153 with % 99 sequence similari% es. Azocasein was used as a substrate for measuring their proteases ac% vi% es daily and their op% mum ac% vi% es were determined. H. morrhuae and N. pallidum showed daily maximum proteases ac% vity on 6 and 4 days, respec% vely. According to the results of the study, it was found that proteases ac% vity was related with diff erent reac% on condi% ons. These condi% ons were detected as diff erent pH (4-11), temperature (4-70°C) and NaCl concentra% on (1-5 M) values. H. morrhuae showed the maximum ac% vity at pH 9.5, 2M NaCl concentra% on and 50°C temperature and N. pallidum displayed the op% mum ac% vity at pH 9.0, 2M NaCl concentra% on and 40°C temperature. KEY WORDS: salted hide, haloarchaea, extracellular protease enzyme, 16S r-RNA sequence analysis. INVESTIGAREA ACTIVITĂȚII PROTEAZICE EXTRACELULARE A DOUĂ ARCHAEA EXTREM HALOFILE DIFERITE IZOLATE DE PE PIELEA CRUDĂREZUMAT. În acest studiu, s-a urmărit cercetarea ac% vității proteazice extracelulare a două archaea extrem halofi le diferite și iden% fi carea acestora u% lizând metode feno% pice și moleculare. Haloarchaea au fost izolate de pe pielea crudă sărată. Izolatele au fost evaluate în funcție de capacitatea de producere a enzimelor de % p protează și s-au selectat două izolate care au ac% vitate proteazică extracelulară. Pentru a iden% fi ca archaea halofi le, s-au u% lizat proceduri de colorare Gram, teste de sensibilitate la an% bio% ce și metode moleculare. Conform rezultatelor iden% fi cării moleculare ARNr 16S, izolatul 1 a fost iden% fi cat ca Halococcus morrhuae JCM 8876 cu asemănări de secvență de 99%, iar izolatul 2 a fost iden% fi cat ca Natrinema pallidum 153 cu asemănări de secvență de 99%. S-a u% lizat azocaseina ca substrat pentru măsurarea zilnică a ac% vității proteazice și s-a determinat ac% vitatea op% mă a acestora. H. morrhuae și N. pallidum au prezentat ac% vitate proteazică maximă zilnică la 6, respec% v 4 zile. Conform rezultatelor studiului, s-a constatat că ac% vitatea proteazică a fost corelată cu diferite condiții de reacție. Aceste condiții au constat în valori diferite ale pH-ului (4-11), ale temperaturii (4-70°C) și ale concentrației de NaCl (1-5 M). H. morrhuae a prezentat ac% vitate maximă la pH 9,5, la concentrația de NaCI de 2M și la temperatura de 50°C, iar N. pallidum a prezentat ac% vitate op% m...