Isolation, purification and characterization of ascorbate oxidase and peroxidase from Cucurbita pepo medullosa

Abstract

Ascorbate oxidase is a well-known copper-containing enzyme however, its biological role and mechanism are still unclear. Reported here is a new protocol for purification of ascorbate oxidase from Cucurbita pepo medullosa (field pumpkin), with improved yields. The enzyme is biochemically characterized, including Michaelis-Menten parameters. Also, purification and characterization of the peroxidase from the same source is described, featuring an unusually high affinity for hydrogen peroxide(low-micromolar).

Metalele în sistemele vii (ed. a II-a)

“…Totuși, această variantă este în general incomodă, întrucât în celulele vii fiecare proteină se află în concentrații extrem de mici, ceea ce înseamnă că procedura de purificare va necesita cantități relativ mari de materie primă și metode foarte sensibile de detectare a proteinei de interes dintre toate celelalte. 9 Excepții sunt unele probe care pot într-adevăr să abunde într-o singură proteină; cea mai notabilă este sângele -unde 40% din volum e constituit de celule roșii, iar 30% din conținutul acestora este reprezentat de hemoglobină. Din doar câțiva mL de sânge se poate obține suficientă hemoglobină pentru o gamă largă de experimente.…”