As espécies do gênero Lippia (Verbenaceae) possuem diversas moléculas bioativas, oriundas do seu metabolismo secundário, que apresentam atividade antimicrobiana, analgésica, antifúngica e imunomoduladora. Este estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana in vitro do extrato metanólico das folhas de L. alnifolia, L. origanoides, L. insignis e L. thymoides frente a microrganismos de importância clínica. Foi realizada uma triagem fitoquímica dos extratos das plantas e a avaliação da atividade antimicrobiana pelo método de difusão em disco, além da determinação da concentração inibitória mínima (MIC) frente às bactérias Bacillus subtilis, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Salmonella choleraesuis, e os fungos Candida albicans e Candida glabrata. A presença de saponinas, terpenos, esteroides, cumarinas, ácidos fenólicos e flavonoides foi observada na análise fitoquímica. Os extratos metanólicos das folhas de L. alnifolia, L. origanoides e L. insignis apresentaram atividade antimicrobiana contra todas os microrganismos testados. O extrato metanólico da L. thymoides apresentou atividade antimicrobiana frente aos microrganismos M. luteus, P. aeruginosa, S. aureus, C. albicans e C. glabrata. A maioria dos extratos apresentou atividade bacteriostática e todos os extratos apresentaram atividade fungistática para C. albicans e fungicida para C. glabrata. A utilização dos extratos de Lippia pode ser uma alternativa viável no tratamento de doenças infecciosas de origem bacteriana e fúngica.