-(Callus induction and betacyanin quantification by HPLC/MS-MS in Alternanthera brasiliana (L.) Kuntze).The objective of this study was to establish a protocol for callus induction and betacyanin production in plants of Alternanthera brasiliana. Explants of A. brasiliana and five combinations of cytokinin and auxin were used for callus induction. Calli were transferred to a Betacyanin Induction Medium (MIB), composed of MS, with 0.5 mg L -1 of thidiazuron (TDZ) and 1 mg L -1 of naphthaleneacetic acid (NAA), and kept in the light for 45 days. The aspect and intensity of pigments were assessed and total betacyanins were quantified in high performance liquid chromatography (HPLC). The combination of internodal segments and a medium containing equilibrium concentrations of auxins and cytokinins was the most efficient metod to induce calli and increased production of betacyanins. The presence of amaranthine in calli of A. brasiliana justifies its medical use and the consequent need for future studies for the large-scale production of this molecule. Keywords: in vitro growth, medicinal plants, phyto-regulators, pigments RESUMO -(Indução de calo e quantificação de betacianinas por CLAE/MS-MS em Alternanthera brasiliana (L.) Kuntze). O objetivo deste estudo foi estabelecer um protocolo para indução de calos e produção de betacianinas em plantas de Alternanthera brasiliana. Para indução da calogênese foram utilizados explantes de A. brasiliana e cinco combinações de citocinina e auxina. Posteriormente os calos foram transferidos para Meio de Indução de Betacianinas (MIB), formado por meio MS, com 0,5 mg L -1 de tidiazuron (TDZ) e 1 mg L -1 de ácido naftalenoacético (ANA), onde permaneceram na luz por 45 dias. Avaliou-se oaspecto e a intensidade de pigmentos e quantificação de betacianinas totais em Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Os segmentos internodais combinados com o meio que contém equilíbrio na concentração de auxinas e citocininas foi mais eficiente para obtenção de calogênese e maior produção de betacianinas. A presença de amarantina, em calos de A. brasiliana, justifica seu uso medicinal e contribui para futuros estudos para produção em larga escala desta molécula. Palavras-chave: cultivo in vitro, fitorreguladores, plantas medicinais, pigmentos