Mapping the substrate binding site of human C1r and C1s with peptide thioesters. Development of new sensitive substrates.

A novel human complement-related protein, C1r-like protease (C1r-LP), specifically cleaves pro-C1s

“…The esterolytic activity of recombinant C1r-LP was assayed using Z-Gly-Arg-SBzl and Boc-Gly-Leu-Ala-Arg-SBzl as substrates. These thioesters have been shown to be good substrates for C1r and C1s [10]. Boc-Gly-Leu-Ala-Arg-SBzl, which mimics the cleavage/activation site of C3, is also hydrolysed by the Bb fragment of factor B [30].…”

“…Activated C1r activates pro-C1s, which in turn activates C4 and C2 leading to the formation of the C3 convertase, C4b2a [7,8]. C1r and C1s also express esterolytic activity against synthetic ester substrates containing a P1 arginine or lysine residue [9,10]. Their activity is regulated by the serpin C1 INH (complement 1 inhibitor) [11], which also inactivates some other blood proteases, including factor XIa [12], factor XIIa [13], kallikrein [14] and the MASPs (mannan-binding lectin-associated serine proteases) [15].…”

Δομική Και Λειτουργική Μελέτη Σερινικών Πρωτεασών Του Συστήματος Του Συμπληρώματος

“…To Clr διασπά συνθετικά υποστρώματα με αργινίνη ή λυσίνη στην Ρ1 θέση, με χαμηλή όμως καταλυτική δραστικότητα. Αντίθετα, το Cls είναι πολύ δραστικότερη εστεράση, με μεγάλη ικανότητα διάσπασης συνθετικών υποστρωμάτων με αργινίνη, λυσίνη ή και τυροσίνη στην Ρ1 θέση (McRae et al, 1981). Η SP δομική περιοχή τους περιέχει τις δύο δισουλφιδικές γέφυρες, που συναντώνται σε άλλες σερινικές πρωτεάσες θηλαστικών, δηλαδή τη γέφυρα μεθειονίνης και τη δισουλφιδική γέφυρα που συνδέει την αρχική με τη δευτερεύουσα θέση δέσμευσης του υποστρώματος (Arlaud και Gagnon, 1981), ενώ η γέφυρα του βρόχου ιστιδίνης απουσιάζει.…”

“…Επιπλέον, κατά τη διαδικασία απομάκρυνσης της ουρίας με διαδοχικές διαπιδύσεις, στο τελικό στάδιο, η πρωτεΐνη κατακρημνιζόταν. ----------1 (Andrews and Baillie, 1979;McRae et al, 1981). Μερική ποσότητα της ανασυνδυασμένης Clr-LP επωάσθηκε στους 37°…”

“…Ομοίως, επιχειρήθηκε η υποβολή της Clr-LP, σε εστερολυτικές δοκιμές με τα συνθετικά, εστερικά υποστρώματα: οξικός-γλυκίνη-λυσίνημεθυλεστέρας (AGLMe), Ζ-γλυκίνη-αργινίνη-θειοβενζυλεστέρας (SBzl) και Boc-γλυκίνηλευκίνη-αλανίνη-αργινίνη-θειοβενζυλεστέρας. Έχει αναφερθεί βιβλιογραφικά, ότι τα δύο πρώτα υποστρώματα, διασπώνται από ενεργοποιημένο Clr/Cls (Andrews et al, 1979;McRae et al, 1981 (Jing Η et al, 2000). To Bb κλάσμα, συνδεδεμένο με τον συνεργιστικό παράγοντα C3b, παρουσιάζει την C3 πρωτεολυτική του δράση.…”