Aroeira-do-sertão (Astronium urundeuva) apresenta aplicabilidade para fins terapêuticos devido às suas características farmacológicas e para uso madeireiro em razão da sua resistência e com grande durabilidade. Isso acarretou a intensa exploração da espécie, levando-a a ser incluída na lista de espécies ameaçadas de extinção. Em decorrência desta situação, a micropropagação é tida como ferramenta em potencial para a propagação e conservação in vitro da espécie. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a germinação e o efeito de diferentes concentrações de ANA associada com TDZ e BAP na multiplicação in vitro de A. urundeuva. Segmentos nodais, obtidos a partir de plântulas germinadas in vitro, foram utilizados como explantes. Os mesmos foram inoculados no meio de cultura MS50%, suplementado com as seguintes concentrações de ANA (0,0; 0,025 e 0,050 mg.L-1) associadas com TDZ (0,0; 0,25; 0,50; 0,75 e 1,00 mg.L-1) e BAP (0,0; 0,25; 0,50; 0,75 e 1,00 mg.L-1). Transcorridos 31 dias, foi avaliado o vigor dos explantes, calejamento e número de brotações. O percentual de germinação in vitro das sementes de A. urundeuva foi de 61%, demostrando a viabilidade da técnica para iniciar a micropropagação. O maior vigor dos explantes foi obtido no meio de cultura suplementado somente com BAP, por sua vez, o TDZ induziu distúrbios fisiológicos nos explantes, como intenso calejamento e posterior necrose dos tecidos. Os resultados obtidos indicam a necessidade de maiores estudos em razão do balanço hormonal auxina/citocinas não foi favorável para a multiplicação in vitro da espécie.