Molecular Approaches to Diagnosis of Pulmonary Diseases Due to Mycoplasma pneumoniae

Abstract

In this prospective study, the use of a culture-enhanced PCR assay for the detection of Mycoplasma pneumoniae, followed by hybridization with a specific probe (MP-HPCR) or without hybridization (MP-PCR), and the use of a nested PCR (MP-NPCR) were evaluated. Clinical samples (190 specimens) from 190 patients with respiratory complaints were incubated in culture broth overnight and then subjected to PCR. The results of the PCR were compared to those obtained by culture, the direct antigen test, and serologic testing by microparticle agglutination and by immunoblotting in unclear cases. The sensitivities were 19 CFU for MP-PCR, 1.9 CFU for MP-HPCR, and 0.019 CFU for MP-NPCR. PCR amplification of the β-globin gene was possible in 98% of cases: after dilution of the β-globin-negative samples, all samples were reactive. Correlation between negative MP-NPCR results and negative serology results was found in 89% of cases; a positive correlation was found with 10% of the patients. Samples from three immunocompromised patients were MP-NPCR positive but serologically negative. High respiratory colonization byM. pneumoniae (>105 CFU/ml) in patients with acute respiratory disease could be detected by culture, MP-PCR, and MP-NPCR. These results indicate that MP-PCR and MP-NPCR are reliable methods for the detection of M. pneumoniae in respiratory tract samples of patients with respiratory complaints.

Infections à Mycoplasma pneumoniae : étude rétrospective en Basse-Normandie de 1997 à 2005. Épidémiologie –– Place de la sérologie et de la PCR pour le diagnostic

“…Plusieurs auteurs ont montré que l'incidence de Mpn en pathologie respiratoire varie grandement d'une étude à l'autre (2 à 30 %), dépendant de la population étudiée (ambulatoire, hospitalière) et des techniques de diagnostic utilisées (sérologie RFC ou sérologie Elisa, PCR) [18,[25][26][27][28]. Le diagnostic des infections à Mpn gagne donc à être amélioré par l'utilisation de techniques standardisées, rapides, sensibles et spécifiques.…”

“…Il utilise classiquement la mise en évidence de l'agent infectieux à partir de prélèvements de la sphère ORL et le diagnostic sérologique avec la recherche d'anticorps anti-Mpn. La culture, lente et difficile, reste la technique de référence réservée aux laboratoires spécialisés mais n'est plus utilisée en routine ; elle fait place aux techniques d'amplification génique (PCR), très sensibles et spécifiques, permettant la détection précoce de faibles charges bactériennes (0,1 à 1 UCC/ml) directement à partir de prélèvements [26,27]. La technique sérologique classique de réaction de fixation du complément, peu sensible et peu spécifique, est abandonnée au profit de techniques Elisa utilisant des antigènes purifiés.…”

“…Dans notre population hospitalière, le pourcentage de prélèvements positifs varie de 1 à 4,7 % entre 1997 et 2005 avec une moyenne de 2,5 %. Cette fréquence est faible, comparée à plusieurs autres études plus ciblées [11,18,25,27]. Lors du pic épidémique, la recherche ciblée de Mpn chez les enfants montre une fréquence de 10,7 %, se rapprochant des chiffres de la littérature.…”

“…La mise en évidence de la bactérie par les méthodes sensibles et spécifiques de PCR a amélioré les performances diagnostiques en termes de rapidité (délai de réponse 24 heures) et de précocité (dès le début des signes cliniques) [27,32,33]. Cependant, l'existence de portage sain au niveau du tractus respiratoire [24], la présence d'inhibiteurs d'amplification dans certains prélèvements, la variabilité de la richesse cellulaire du prélèvement peuvent influencer fortement l'interprétation des résultats PCR.…”

“…Parmi [18,25,27,29,31,33,35]. Les discordances -sérologie positive/PCR négative -peuvent s'expliquer par l'existence d'une charge bactérienne faible, en dessous du seuil de détection, du fait d'un prélèvement retardé ou plus probablement d'un prélèvement défectueux.…”