Molecular detection of Streptococcus agalactiae in bovine raw milk samples obtained directly from bulk tanks

Elias, Adão Robson; Cortéz, Adriana; Brandão, Paulo Eduardo; Silva, Rodrigo da; Langoni, Hélio

doi:10.1016/j.rvsc.2011.07.016

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“…2 Standard curve of SAG ATCC 13813 count (log 10 cfu/mL) as determined by plate counting (log 10 cfu/mL) of SAG-inoculated skim milk and by real-time quantitative PCR (SAG qPCR, CtSAG/mL). C t = threshold cycle of the qPCR reaction Independent assays A 0 and A 00 and B 0 and B 00 were independently performed on day 1 and 2; C t = threshold cycle in which SAG qPCR occurred; CV A and CV B = CV between C t obtained from assays A 0 and A 00 and B 0 and B 00 ; CV 1, 2 = CV between C t obtained from assays performed on day 1 and 2 a Count (cfu/mL) of Streptococcus agalactiae ATCC 13813 determined by modified Edward's agar with 5 % sheep blood (Oxoid, Basingstoke, UK) from BTM were different than those found by Elias et al [9], which reported 7.77 9 10 2 cfu/mL. Differences associated with composition from different types of milk samples (BTM and CM) may have influenced the efficiency of DNA extraction directly from milk samples.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 79%

“…These difficulties were considered as critical points associated with DNA extraction directly from milk samples [7]. Furthermore, Elias et al [9] reported a DNA extraction protocol directly from milk that was efficient in lysing bacterial cell walls without damaging the target DNA. For confirmation of the DNA extraction, amplification using the set of BMCB primers (control test) was used because DNA extracted by this protocol could not be read by NanoDrop, likely due to the presence of inhibitory substances that remained even after extraction [7].…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

“…S. agalactiae (Lancefield group B) is an obligate contagious parasite of the mammary gland, which can survive for a long time in the gland [23]. This agent was a major cause of mastitis in the pre-antibiotic era, mostly causing subclinical mastitis which tended to be chronic [9].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

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Detection and Enumeration of Streptococcus agalactiae from Bovine Milk Samples by Real-Time Polymerase Chain Reaction

et al. 2015

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The aim of this study was to evaluate the use of real-time polymerase chain reaction (qPCR) combined with DNA extraction directly from composite milk and bulk tank samples for detection and enumeration of Streptococcus agalactiae (SAG) causing subclinical mastitis. Dilutions of sterile reconstituted skim milk inoculated with SAG ATCC 13813 were used to establish a standard curve (cfu/mL) for the qPCR assay targeting SAG. The analytical sensitivity and repeatability of the qPCR assay were determined. Bulk tank (BTM; n = 38) and composite milk samples (CM; n = 26) collected from lactating cows with positive isolation of SAG were submitted to the qPCR protocol and SAG plate counting, with results from both methods compared. Amplification of DNA was not possible in two out of 64 samples, indicating that qPCR was able to detect SAG in 96 and 97% of BTM and CM samples, respectively. The inter-assay coefficient of variation was <5%, showing that the technique had adequate repeatability. The qPCR protocol can be a high-throughput and rapid diagnostic assay to accurately detect SAG from BTM and CM samples compared with conventional microbiological culture method. However, the evaluated qPCR protocol is not accurate for enumerating SAG in milk samples, probably due to quantification of DNA of non-viable cells.

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Section: Discussionmentioning

confidence: 79%

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

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Detection and Enumeration of Streptococcus agalactiae from Bovine Milk Samples by Real-Time Polymerase Chain Reaction

et al. 2015

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“…A análise dessas amostras possibilita estimar a ocorrência de mastite no rebanho e investigar possíveis problemas relacionados ao aumento da CBT e da CCS, além de estimar a prevalência e a ocorrência de patógenos causadores de mastite, especialmente os contagiosos Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae (ELIAS et al, 2012;KEEFE, 2012).…”

Section: Qualidade Do Leiteunclassified

“…É de difícil controle por ser uma doença de etiologia multifatorial. É caracterizada por modificações físicas, químicas e microbiológicas no leite (ELIAS et al, 2012) e por uma resposta inflamatória da glândula mamária que pode ser causada por alterações metabólicas e fisiológicas, trauma do úbere, ou mais frequentemente por micro-organismos patogênicos (OVIEDO-BOYSO et al, 2007).…”

Section: Mastite Bovinaunclassified

Efeito da mastite bovina sobre a composição e indicadores de higiene em leite de tanque

Macedo¹

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DEDICOAos meus pais, José Maria e Helena, pelo amor, carinho e educação recebida e pelo apoio e dedicação em todos os momentos.Às minhas irmãs, Adriana e Luciana, pelo amor, carinho, apoio e amizade sempre dedicados. Amo vocês! AGRADECIMENTOSA Deus pela vida, pelas oportunidades, pelos desafios, dificuldades e pelas conquistas.Aos meus pais, José Maria Pereira de Macedo e Helena Tuulikki Nori, e minhas irmãs, Adriana Nori de Macedo e Luciana Nori de Macedo, pelo amor e dedicação incondicional. E por todos os ensinamentos e apoio em todos os momentos de minha vida. À FAPESP pela concessão da bolsa de mestrado.À amiga Cristina Simões Cortinhas (Cris) que esteve presente em todas as fases do experimento desde a sua elaboração, execução e até a conclusão, dando todo o apoio necessário e valiosas sugestões. Pela sempre agradável companhia em todos os momentos dentro e fora do laboratório e pelo apoio e incentivo tanto na vida profissional quanto na vida pessoal.À amiga Alessandra Módena Orsi que auxiliou em todas as etapas desde que chegou ao laboratório para fazer seu estágio. E pela sempre agradável companhia em todos os momentos dentro e fora do laboratório. À Lucinéia Mestieri, especialista do Laboratório Qualileite e, sobretudo, amiga em todos os momentos, pelo auxílio e apoio prestados durante toda a execução do experimento e pelo apoio e incentivo sempre dedicados. À amiga Taissa de Souza Canaes que sempre me apoiou desde a época da graduação e que foi quem, ainda na graduação, me mostrou a beleza e a importância da pesquisa. E que continuou me auxiliando e incentivando durante todo o mestrado, mesmo não participando do mesmo grupo de trabalho.Às amigas Nara Ladeira de Carvalho, Camila Silano e Daniele Cristine Beuron, que me auxiliaram sempre que puderam na execução do experimento e pelo apoio e amizade.Ao técnico do Laboratório Qualileite, José Franchini Garcia Moreno (Zeca), pelo apoio prestado durante a aquisição dos materiais para o experimento e pela amizade.Aos amigos e companheiros do Laboratório Qualileite pela amizade e apoio sempre que necessário: Aline Gerato Dibbern, Alessandra Módena Orsi, Camila Silano, Cristian CCS em três grupos: baixa (< 250.000 células/mL), média (> 250.000 e < 750.000 células/mL) e alta CCS (> 750.000 células/mL). Após a seleção dos rebanhos, amostras de leite de tanque foram coletadas quinzenalmente, por um período de três meses, totalizando 1380 amostras, que foram submetidas às análises de composição, CBT, CP e CC. Foi observado menor CBT e CC nos rebanhos com menor CCS, no entanto, rebanhos de média e alta CCS apresentaram maiores teores de gordura, proteína e sólidos totais. Foi observada média correlação entre CBT e CP (r = 0,6215) e entre CP e CC (r = 0,3692). Entre os indicadores de higiene e a composição do leite foram observadas correlações baixas e negativas entre CBT e gordura (r = -0,0585), CP e gordura (r = -0,0688) e CP e ST (r = -0,0662). Os rebanhos com CCS < 250.000 células/mL apresentam maior qualidade higiênica do leite de tanque, no entanto, quanto à co...

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Characterization and genome sequencing of a novel bacteriophage infecting Streptococcus agalactiae with high similarity to a phage from Streptococcus pyogenes

et al. 2013

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A novel bacteriophage, JX01, specifically infecting bovine Streptococcus agalactiae was isolated from milk of mastitis-affected cattle. The phage morphology showed that JX01 belongs to the family Siphoviridae, and this phage demonstrated a broad host range. Microbiological characterization demonstrated that nearly 90 % of JX01 phage particles were adsorbed after 2.5 min of incubation, that the burst size was 20 virions released per infected host cell, and that there was a latent period of 30 min. JX01 was thermal sensitive and showed acid and alkaline resistance (pH 3-11). The genome of JX01 was found to consist of a linear, double-stranded 43,028-bp DNA molecule with a GC content of 36.81 % and 70 putative open reading frames (ORFs) plus one tRNA. Comparative genome analysis revealed high similarity between JX01 and the prophage 315.2 of Streptococcus pyogenes.

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Molecular detection of Streptococcus agalactiae in bovine raw milk samples obtained directly from bulk tanks

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Detection and Enumeration of Streptococcus agalactiae from Bovine Milk Samples by Real-Time Polymerase Chain Reaction

Efeito da mastite bovina sobre a composição e indicadores de higiene em leite de tanque

Characterization and genome sequencing of a novel bacteriophage infecting Streptococcus agalactiae with high similarity to a phage from Streptococcus pyogenes

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