Molecular Identification of Brucella abortus Collected from Whole Blood Samples of Seronegative Dairy Cattle with Reproductive Disorders in Central Java, Indonesia

Wuryastuty, Hastari

doi:10.29261/pakvetj/2019.010

Cited by 4 publications

(5 citation statements)

References 10 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…Los signos clínicos provocadas por Brucella spp. en los animales infectados generalmente se relacionan con problemas reproductivos como aborto, infertilidad, retención de placenta y nacimiento de terneros débiles entre otros [43].…”

Section: Pcr-amosunclassified

Tipificación molecular de especies de Brucella en ganaderías lecheras de la provincia del Azuay – Ecuador

Andrade-Guzmán,

Vallecillo,

Vintimilla-Rojas

et al. 2023

RC FCV-LUZ

View full text Add to dashboard Cite

La Brucelosis es una enfermedad zoonótica extendida a nivel mundial en el ganado bovino, ocasionada principalmente por Brucella abortus, previamente reportada en ciertas regiones del Ecuador. La caracterización de las cepas circulantes de Brucella spp. en ganaderías lecheras resulta importante para comprender la epidemiología de esta enfermedad. La tipificación bacteriológica de la Brucella spp. es un proceso lento, riesgoso y requiere de laboratorios especializados. El objetivo de este estudio fue tipificar las cepas de Brucella spp. que afectan al ganado bovino en la provincia del Azuay, mediante ensayos moleculares, a partir de muestras de sangre y leche de vacas seropositivas a brucelosis. En fincas seropositivas a ELISA-Indirecto en leche, se seleccionaron 70 vacas Holstein mestizas, reactoras individualmente a las pruebas Rosa de Bengala y confirmadas con ELISA competitivo. Se extrajo el ADN de esas muestras de sangre y leche confirmando en un inicio la viabilidad del material genético de bovino con oligonucleótidos específicos para el género Bos. La amplificación de ADN para Brucella spp. se realizó por PCR-AMOS con cebadores de genero para la región IS711 y de especie para Brucella abortus, Brucella mellitensis, Brucella suis y Brucella ovis. Se pudo identificar ADN bovino en 65 (92,8 %) muestras de leche y en 62 (88,5 %) muestras de sangre. Un total de 62 muestras de ADN extraído de leche resultaron positivas (95,4 %) al género Brucella spp. y todas las muestras de sangre resultaron negativas. El PCR-AMOS mostró bandas con un peso molecular de 498 pb en muestras de cuatro animales correspondiente a B. abortus. Este es el primer estudio de identificación molecular en la provincia del Azuay con evidencia científica de la especie de Brucella spp. circulante en las ganaderías bovinas de la zona, contribuyendo de base para la identificación futura de los biovares de B. abortus aún no reportados en esta zona del país.

show abstract

Section: Pcr-amosunclassified

Tipificación molecular de especies de Brucella en ganaderías lecheras de la provincia del Azuay – Ecuador

Andrade-Guzmán,

Vallecillo,

Vintimilla-Rojas

et al. 2023

RC FCV-LUZ

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Hingga saat ini Polymerase Chain Reaction (PCR) telah berhasil digunakan untuk deteksi brucella dari berbagai jenis sampel seperti serum (Thorat et al, 2017;Parthiban et al, 2019), susu (Noor et al, 2015), buffy coat, semen dan darahutuh (Khamesipour et al, 2013;Wuryastuty et al, 2019). Menurut Zerva et al (2001), darahutuh atau serum merupakan sampel terbaik untuk deteksi dan diagnosis berbagai penyakit infeksius termasuk brucella.…”

Section: Pendahuluanunclassified

“…Hal ini disebabkan karena darah-utuh dan serum merupakan sampel yang relatif mudah untuk dikoleksi, ditangani dan diproses serta memiliki risiko yang lebih rendah sehingga direkomendasikan untuk digunakan dalam diagnosis brucellosis. Selain itu, proses ekstraksi DNA dari sampel darah-utuh maupun serum juga lebih mudah dibandingkan dengan ekstraksi DNA dari jaringan (Thorat et al, 2017;Wuryastuty et al, 2019). Meskipun tehnik ekstraksi DNA yang telah dikembangkan oleh para ahli dan tersedia secara komersial adalah efektif, tetapi secara umum dapat mengakibatkan berkurangnya jumlah atau bahkan hilangnya sampel DNA yang penting dan memiliki potensi timbulnya kesalahan penguji dalam pencampuran sampel atau terjadinya kontaminasi silang antar sampel.…”

Section: Pendahuluanunclassified

“…Beberapa peneliti telah memanfaatkan uji PCR dalam deteksi brucellosis dalam serum dan sampel darah utuh dan berhasil mengamplifikasi patogen yang ada di dalam sirkulasi darah. Uji PCR konvensional memiliki sensitivitas dan spesifisitas tinggi dan dapat mendeteksi terjadinya infeksi pada tahap yang lebih awal bila dibandingkan dengan uji serologis, serta memiliki hubungan yang erat (> 90%) dengan hasil uji realtime PCR untuk deteksi antigen Brucella abortus (Wuryastuty et al, 2019) maupun Brucella mellitensis (Al-Gharadi et al, 2011).…”

Section: Hasil Dan Pembahasanunclassified

See 1 more Smart Citation

Deteksi Brucella abortus dari Sampel Darah-Utuh dengan Uji Polymerase Chain Reaction Tanpa Ekstraksi DNA

Ardiyanto

Wuryastuty²,

Wasito³

2020

Jurnal Sain Veteriner

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

Brucellosis is a zoonotic disease that cause a significant economic losses for cattle industries worldwide. A rapid, precise and accurate diagnosis technique for diagnosis of brucellosis in all stages of the infection is definitely required. Blood-samples are widely used for PCR-based DNA analysis because they are easily collected, handled, and processed. Direct PCR analysis without DNA extraction has been attempted to reduce time and costs for routine analysis. This approach is promising but is still limited by the presence of PCR inhibitors that is naturally found in the blood samples. The objective of this study was to compare the effectivity of direct PCR technique with or without DNA extraction for detection of Brucella abortus in the blood samples. Three whole-blood samples from brucella infected dairy cattle and five whole-blood samples from beef cattle that having abortion were used as samples in this study. A pair of bcsp31 primers and IS711 primers were used for amplification of genus-specific and species-specific of Brucella. The results showed that amplicon in the position of 223 bp and 498 bp that are specific for B. abortus were detected from all of the samples that were analyzed on 1.5% agarose gels. Based on the result it could be concluded that direct PCR analyses without DNA extraction is a sensitive, specific, simple, rapid and inexpensive assay for detecting B. abortus in the whole blood samples for either dairy or beef cattle and therefore it could improve the existing surveillance and control programs for brucellosis. Keywords : brucellosis; direct PCR; PCR inhibitor; whole-blood sample; without DNA extraction Abstrak Brucellosis adalah penyakit zoonosis yang menyebabkan kerugian ekonomi yang signifikan bagi industri ternak di seluruh dunia. Teknik diagnosis yang cepat, tepat dan akurat yang dapat digunakan untuk diagnosis brucellosis pada semua tahap infeksi sangat diperlukan. Sampel darah banyak digunakan untuk analisis PCR berbasis DNA karena mudah untuk dikoleksi, ditangani, dan diproses. Metoda PCR langsung tanpa didahului dengan ekstraksi DNA dikembangkan dengan tujuan penghematan waktu dan beaya untuk analisa secara rutin. Tehnik ini sangat menjanjikan tetapi memiliki keterbatasan karena adanya senyawa penghambat PCR yang secara alami terkandung di dalam sampel darah . Tujuan dari penelitian ini adalah membandingkan efektifitas antara uji PCR secara langsung dengan ekstraksi dan tanpa ekstraksi DNA untuk deteksi Brucella abortus di dalam darah. Tiga ( 3 ) sampel darah-EDTA yang berasal dari sapi penderita brucellosis dan 5 sampel darah-EDTA dari sapi potong yang mengalami abortus digunakan sebagai sampel dalam penelitian ini. Pasangan primer bcsp31 dan primer IS711 untuk amplifikasi gen dan species specific digunakan dalam penelitian. Hasil menunjukkan bahwa amplikon/pita pada posisi 223 bp dan 498 bp yang spesifik untuk Brucella abortus terdeteksi dari semua sampel yang dianalisa dengan gel agarosa 1,5%. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa uji PCR secara langsung tanpa didahului dengan ekstraksi DNA merupakan tehnik yang sensitif, spesifik, sederhana, cepat dan murah untuk deteksi B. abortus di dalam sampel darah baik sapi perah maupun sapi potong dan oleh karena itu diharapkan dapat digunakan untuk memperbaiki program kontrol dan survailance yang telah ada untuk brucellosis. Kata kunci : brucellosis; PCR langsung; penghambat PCR; sampel darah-utuh; tanpa ekstraksi DNA

show abstract

“…However, these procedures are expensive and are not readily available, particularly in developing countries such as Egypt. Alternatively, several studies have employed more cost effective discrimination approaches, such as IS 711 gene sequence variations, PCR restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP), and Repetitive element sequence-based PCR (rep-PCR) [ [10] , [11] , [12] ]. However, the high genetic similarity between Brucella species can occasionally reduce the efficiency of these tools in discriminating between isolates of same species, especially when these tools were used individually [ 10 ].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Risk factors and Molecular genotyping of Brucella melitensis strains recovered from humans and their owned cattle in Upper Egypt

et al. 2021

View full text Add to dashboard Cite

Brucellosis is a zoonosis that has a devastating impact on the economy and public health, particularly in the Middle East, including Egypt. This study aimed to define risk factors associated with brucellosis in humans and in their cattle in Fayoum governorate - Upper Egypt. Also, molecular genotyping of recovered Brucella isolates from human cases and their cattle to assess the potential cross-species transmission in the study region. Data were obtained via double matched case–control studies for brucellosis in humans (106 cases and 160 controls) and in their cattle (78 cattle cases and 105 cattle controls). The results of multivariate regression analysis revealed that predictors of human brucellosis were animal-related occupations (OR 2.1, P 0.02), previous infection in other household members (OR 3.2, P 0.007), eating home-made soft cheese (OR 2.3, P 0.03), and exposure to cattle abortions (OR 6.9, P < 0.001). For cattle, predictors of brucellosis were maturity ≥2 years of age (OR 2.9, P 0.01), ≥2 animals reared by the same household (OR 3.7–6.9, P ≤ 0.001), and recent abortion (OR 15.2, P 0.01). Twelve Brucella isolates were recovered from eight human cases (7.5%, 8/106) and four cattle cases (6.2%, 4/65). All isolates were B. melitensis biovar 3. Analysis of the IS711 gene sequence revealed complete homology (100%) between isolates. Six virulence genes were utilized for virutyping: virB (100%), omp25 (100%), amiC (100%), ure (91.7%), wbkA (91.7%), and bvfA (75%). Virutyping revealed four virutypes: V1 (lack bvfA , 16.7%), V2 (harbored all genes, 66.7%), V3 (lack wbkA , 8.3%), and V4 (lack wbkA and ure , 8.3%). Repetitive extragenic palindromic PCR (REP-PCR) typing revealed two REP types. Combined REP-PCR/virulence genotyping revealed five different genotypes (G1–G5) for the detected isolates and a unique genotype for the reference strain (G6, B. melitensis bv3 Ether). Human and cattle isolates from the same household had matched genotypes. In conclusion, there were widespread risk factors among the cases studied. Health education for high-risk groups is essential for disease prevention, and combined REP-PCR/virulence genotyping is a quick tool for traceability, particularly in developing countries endemic with brucellosis as Egypt.

show abstract

Molecular Identification of Brucella abortus Collected from Whole Blood Samples of Seronegative Dairy Cattle with Reproductive Disorders in Central Java, Indonesia

Cited by 4 publications

References 10 publications

Tipificación molecular de especies de Brucella en ganaderías lecheras de la provincia del Azuay – Ecuador

Tipificación molecular de especies de Brucella en ganaderías lecheras de la provincia del Azuay – Ecuador

Deteksi Brucella abortus dari Sampel Darah-Utuh dengan Uji Polymerase Chain Reaction Tanpa Ekstraksi DNA

Risk factors and Molecular genotyping of Brucella melitensis strains recovered from humans and their owned cattle in Upper Egypt

Contact Info

Product

Resources

About