Multisubunit complex eEF1H in human glial tumors: from mRNA to protein

Abstract

Aim. To investigate protein level of all subunits of the eukaryotic elongation translation factor eEF1H (eEF1A, eEF1Bα, eEF1Bβand eEF1Bγ) in glial tumors of human brain in comparison with normal brain. Methods. The eEF1H components content has been investigated in human glioblastoma clinical samples by Western blot analysis. Results. To determine the eEF1Bα, eEF1Bβ and eEF1Bγ content, the polyclonal antibodies against all eEF1H subunits were obtained. The tendency of the eEF1Bγ protein level to increase in glioblastomas was observed. There were no significant differences in the eEF1A, eEF1Bα and eEF1Bβ protein contents. Conclusions. In the previous report we analysed the expression of all eEF1H subunits in human glial brain tumor on the mRNA level. This study showed that eEF1Bγ was overexpressed while no significant changes in other eEF1H subunits were observed. It suggests a possible function of eEFBg which is cancer-related and is not connected with the functioning of eEF1H complex in translation

Unbalanced expression of the translation complex eEF1 subunits in human cardioesophageal carcinoma

“…Primary monoclonal anti‐eEF1A (Upstate), home‐made mouse polyclonal anti‐eEF1Bα and anti‐eEF1Bβ as well as rabbit polyclonal anti‐eEF1Bγ were used for the analysis of corresponding proteins in Western blots. The antibodies were shown to be specific for the antigen present in both purified state and tissue lysate [20]. After each ECL‐reagent (Pierce, Rockford, IL, USA) treatment, membranes were stripped with PBS‐T (1·47 mM KH 2 PO 4 , 4·29 mM Na 2 HPO 4 *7H 2 O, 137 mM NaCl, 2·68 mM KCl, 0·1% Tween‐20, pH 7·3) and re‐probed with antibodies against another eEF1 subunit.…”

Expression of the subunits of multiprotein translation elongation complex eEF1H in human renal carcinomas

“…Зок ре ма, суб оди ниці eEF1 або весь компплекс у ціло му мо жуть бу ти за лу че ни ми до про цесів кан це ро ге не зу. Так, підви ще ну експресію тієї чи іншої суб оди ниці та ко го ком плек су не одно ра зо во спостеріга ли за різних типів ра ку [6][7][8][9][10][11][12], але, на жаль, ці дані не да ва ли уяв лен ня про те, чи відбу ва ють ся при онко ге незі ко ор ди но вані зміни всіх ком по нентів eEF1. Крім то го, май же в усіх по пе редніх ро бо тах виз на ча ли кількість мРНК, проте зміни рівня відповідних білків прак тич но не вив ча ли.…”

“…Мем бра ни бло ку ва ли 5 %-м су хим зне жи ре ним мо ло ком у со льо во му фос фат но му бу фері з Tween-20 (PBS-T: 1,47 мM KH 2 PO 4 , 4,29 мM Na 2 HPO 4 × 7H 2 O, 137 мM NaCl, 2,68 мM KCl, 0,1 % Tween-20, pH 7,3) про тя гом 1 год з на ступ ною інку бацією з пер вин ни ми ан титіла ми. Ми шачі мо нок ло нальні ан титіла про ти eEF1A («Upstate», США), полікло нальні ан титіла про ти eEF1Ba та eEF1Bb, а та кож полікло нальні антитіла кро ля про ти eEF1Bg ви ко рис то ву ва ли для виз на чен ня відповідних білків у тка нин них ліза тах [9]. Після кож ної об роб ки мем бран ECL ре а ген том («Pierce», США) мем бра ни про ми ва ли роз чи ном PBS-T та інку бу ва ли з ан титіла ми про ти b-ак ти ну («Santa Cruz», США).…”

“…Ціка во, що рівень про ду ку ван ня eEF1Ba і мРНК, що ко дує цю суб оди ни цю, вза галі не збільшу вав ся у жод но му зраз ку. У пух лин них тка ни нах шлун ка [13] та го лов но го моз ку [8,9] та кож на й менші зміни рівня експресії се ред суб оди ниць eEF1H бу ли ха рактерними для eEF1Ba, що мо же свідчи ти про на йстабільнішу експресію цієї суб оди ниці ком плек су і віднос ну не за лежність кількості eEF1Ba у кліти нах від інду ко ва них пух ли ною змін. Та ким чи ном, можна про гно зу ва ти, що са ме ця суб оди ни ця ком плексу eEF1H у пер шу чер гу відповідає за ГДФ/ГТФ-обмін у мо ле кулі eEF1A і її пе ре бу ван ня в ком плексі eEF1H є кон сти ту тив ним.…”

“…Не зафіксо ва но чітко го зв'яз ку між зміна ми вмісту мРНК, що ко дує ту чи іншу суб оди ни цю, і відповідно го білка. Аналогічну си ту ацію спос теріга ли і в досліджен нях eEF1H при карідо е зо фа ге аль но му раку та гліоб лас то мах [8,9,13].…”