Neutral endopeptidase (EC 3.4.24.11) modulates the contractile effects of neuropeptides on muscle cells from the guinea‐pig stomach

Abstract

SUMMARYThe objectives of this investigation were to characterize neuropeptide-degrading enzymes on the surface of gastric muscle cells and to determine their physiological function. Neutral endopeptidase (NEP, EC 3.4.24. 11) activity was measured using the fluorogenic substrate glutaryl-Ala-Ala-Phe-4-methoxy-2-naphthylamine. The NEP inhibitors phosphoramidon and DL-thiorphan (1 /tM) inhibited degradation of the substrate by gastric muscle membranes by 100% and by freshly dispersed gastric muscle cells by 55-60%. The phosphoramidon or DLthiorphan-inhibitable activity, attributed to NEP, of membranes was 112+40Opmolh-1 (,ug protein)-1 and of cells was 4 2 + 0-8 nmol h-' (106 cells)-'. This activity was associated with membranes prepared from cells and was not detected in the cytoplasm or in the cell incubation solution. Gastric inuscle membranes were fractionated by electrophoresis and analysed by Western blotting using two NEP antisera. Both antisera recognized a protein in membranes with an electrophoretic mobility identical to that of recombinant human NEP and an apparent molecular mass of -95 kDa. Neuropeptides were degraded by membranes with specific activities in the order of

Fatty Acids and Glucose Increase Neutral Endopeptidase Activity in Human Microvascular Endothelial Cells

“…Membrane preparations were performed according to a method described by Gu et al (13). After completion of each 48-h experiment, the confluent HMEC monolayers were washed twice with 5 mL of phosphate-buffered saline and 10 mL of cold TRIS/MgCl buffer was added to each sample.…”

In vivo βιολογική αξιολόγηση και φαρμακοκινητική μελέτη με χρήση HPLC-MS-MS του Leuprolide και αναλόγων του που εμπλέκονται στη θεραπεία του καρκίνου

“…Χξ εη ημφημο, πνδζζιμπμζήεδηε ημ DL -Thiorphan, DL-3-Mercapto-2-benzylpropanoylglycine (πήια 6.5), βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηδξ μοδέηενδξ εκδμπεπηζδάζδξ 24.11 ςξ ημ έκγοιμ πμο θένεζ ηδκ εοεφκδ βζα ηδκ ημπή ηδξ LHRH ηαζ ηςκ οπυ ιεθέηδ ακαθυβςκ ηδξ ζημκ δεζιυ -ζηυπμ Ser 4 -Tyr 5 , πανμοζία κεθνζηχκ ιειανακχκ ιφα. Πνυηεζηαζ βζα έκακ εζδζηυ ηαζ ζζπονυ ακαζημθέα ηδξ μοδέηενδξ εκδμπεπηζδάζδξ 24.11 (Kanazawa and Johnston, 1991;Gu et al, 1993;Kikkawa et al, 2002 (Sofianos et al, 2008). ημκ ακηίπμδα, ηα επίπεδα ηδξ ηεζημζηενυκδξ ζημ πθάζια, ηαηυπζκ πμνήβδζδξ ημο leuprolide, αολήεδηακ ζδιακηζηά βζα ημ ζφκμθμ ηςκ οπυ ιεθέηδ πνμκζηχκ ζδιείςκ t = 1 -6 h, ιεηά ηδ δυζδ (***, p < 0,001 ζοβηνζηζηά ιε ηα δείβιαηα -ιάνηονεξ).…”

“…Χξ εη ημφημο, πνδζζιμπμζήεδηε ημ DL -Thiorphan (DL-3-Mercapto-2benzylpropanoylglycine) βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηδξ μοδέηενδξ εκδμπεπηζδάζδξ 24.11 ςξ ημ έκγοιμ πμο θένεζ ηδκ εοεφκδ βζα ηδκ ημπή ηδξ LHRH ηαζ ηςκ οπυ ιεθέηδ ακαθυβςκ ηδξ ζημκ δεζιυ -ζηυπμ Ser 4 -Tyr 5 , πανμοζία κεθνζηχκ ιειανακχκ ιφα. Πνυηεζηαζ βζα έκακ εζδζηυ ηαζ ζζπονυ ακαζημθέα ηδξ μοδέηενδξ εκδμπεπηζδάζδξ 24.11 (Kanazawa and Johnston, 1991;Gu et al, 1993;Kikkawa et al, 2002). πςξ οπμζηδνίγεηαζ αζαθζμβναθζηά, μ έηενμξ πεπηζδζηυξ δεζιυξ Trp 3 -Ser 4 απμηεθεί δεζιυ -ζηυπμ ημο ιεηαηνεπηζημφ εκγφιμο ηδξ αββεζμηεκζίκδξ Η (Flouret et al, 1987 (Millar et al, 2004), (ii) ηδξ δοκαηυηδηαξ πανμπήξ ζδιακηζηήξ πθδνμθμνίαξ, ακαθμνζηά ιε ηδκ in vitro ηαζ in vivo ζηαεενυηδηα (Κεθάθαζα 4 ηαζ 5) ιε έκα ζπεηζηά ιζηνυ πμζυ πεπηζδίμο (1 -2 mg), (iii) ηδξ δοκαηυηδηαξ πανμπήξ ζδιακηζηήξ πθδνμθμνίαξ, ακαθμνζηά ιε ημκ αβςκζζιυ ζημκ οπμδμπέα ηδξ LHRH -Η (in vivo εζδζηή βζα ημκ οπμδμπέα νφειζζδ) πνδζζιμπμζχκηαξ ηδκ ηεζημζηενυκδ ςξ αζμδείηηδ (Κεθάθαζμ 7) (iv) ηαεχξ επζηνέπεζ ημκ πνμζδζμνζζιυ ηδξ δμζμθμβίαξ πμο απαζηείηαζ πνμξ επίηεολδ ηδξ απμηεθεζιαηζηυηδηαξ, αάζεζ ηδξ δνάζδξ ζηδκ οπυθοζδ ηαζ (v) δφκαηαζ κα απμηεθέζεζ ηδ αάζδ επαηυθμοεςκ πεζναιάηςκ ζε βεκεηζηά ηνμπμπμζδιέκμοξ ιφεξ ή γςζηά πνυηοπα πμο θένμοκ λεκμβναθήιαηα (Sharpless and Depinho, 2006;Morgan et al, 2008 Πανυιμζα ήηακ ηα εονήιαηα, ηαηυπζκ πμνήβδζδξ ημο leuprolide ηαζ ημο goserelin (ειπμνζηά δζαεέζζια ακάθμβα), ηςκ μπμίςκ δ ακηζ -πμθθαπθαζζαζηζηή δνάζδ οπμζηδνίγεηαζ αζαθζμβναθζηά ηαζ ιάθζζηα, ζηδ ζοβηέκηνςζδ ημο 1 ιΜ (Limonta et al, 1992;Marelli et al, 2006;Marelli et al, 2007).…”

Ανάπτυξη, Βιοκατανομή Και Φαρμακοκινητική Μελέτη Πεπτιδικών Αναλόγων Μπομπεσίνης Επισημασμένων Με Διαγνωστικά Ραδιονουκλίδια Για Την Αντιμετώπιση Του Καρκίνου

“…Τέτοια ένζυμα υπάρχουν σε διάφορα σημεία στον οργανισμό όπως το κεντρικό νευρικο, στο γαστρεντερικό, το ουροποιητικό σύστημα κ.α. και η φυσιολογική τους δράση σχετίζεται με τον μεταβολισμό και την απενεργοποίηση διαφόρων φυσιολογικών νευροπεπτιδίων ή ρυθμιστικών πεπτιδίων του οργανισμού 137,138 .…”