Objetivou-se neste trabalho obter um extrato bruto etanólico de capim-santo e testar o seu efeito na refrigeração de espermatozoides epididimários de bovinos. O Cymbopogon citratus foi obtido in natura e submetido à secagem e, após isso, feita a extração em etanol. O extrato bruto foi caracterizado quanto aos seus metabólitos secundários, quantidade de açúcares redutores e potencial antioxidante. O extrato foi diluído em solução TRIS e adicionado ao diluidor TRIS-gema nas concentrações de 0% (TG), 1% (TGE1), 5% (TGE5) e 10% (TGE10). Os diluidores formados foram avaliados quanto à osmolaridade, potencial hidrogeniônico e capacidade de preservação em espermatozoides bovinos refrigerados a 5 °C, durante 48 h. Os resultados mostraram que o extrato etanólico bruto de capim-santo possui, em sua composição, flavonoides, glicosídeos, taninos e esteroides, assim como 31% de açúcares redutores, além de um potencial antioxidante de valor IC₅₀ = 0,1965 mg/mL e equivalência ao Trolox (TEAC) = 0,1012 mM, considerando a concentração de 1,0 mg/mL. Quanto à avaliação dos espermatozoides acrescidos do extrato no diluidor para criopreservação, os grupos que tiveram adição de extrato (TGE1, TGE5 e TGE10) obtiveram resultados semelhantes ao grupo controle (TG) tanto em motilidade, integridade de membrana e funcionalidade de membrana em relação aos tempos testados, não apresentando diferença significativa (p> 0,05). Diante dos resultados obtidos, pode-se afirmar que a adição do extrato etanólico bruto de capim-santo, nas concentrações testadas, não influencia na refrigeração de espermatozoides epididimários bovinos. Contudo, por apresentar potencial antioxidante e níveis consideráveis de açúcares redutores, o extrato etanólico bruto de capim-santo pode ser avaliado, em outras diferentes concentrações, como aditivo na criopreservação de espermatozoides.