OPTIMIZACIÓN DE UNA TÉCNICA PARA LA EXTRACCIÓN DE UN ADN DE HECES DE VICUÑA (Vicugna vicugna mensalis).

Abstract

RESUMENActualmente es posible determinar el estatus de especies silvestres mediante el análisis de ADN extraído de muestras no invasivas como las heces. Aunque dichos análisis suelen ser dificultosos debido principalmente a la composición y conservación de las heces, se ha demostrado en muchas especies que con el desarrollo de métodos adecuados de extracción es posible maximizar la fiabilidad y eficacia de este procedimiento. Por tanto, el objetivo del presente estudio fue optimizar un método de extracción de ADN de heces de vicuña Vicugna vicugna mensalis, especie clasificada como casi amenazada en el Perú, con la finalidad de obtener ADN de suficiente calidad para análisis moleculares. Se recolectaron 51 muestras de heces durante los meses de agosto y septiembre de 2008 en dos comunidades vicuñeras ubicadas a más de 4600 msnm en los departamentos de Junín y Moquegua. Luego de observar la defecación, las muestras fueron recolectadas en forma inmediata, conservadas en etanol y transportadas al laboratorio para la extracción del ADN. El kit comercial QIAamp® DNA Stool Mini Kit (QIAGEN) fue modificado para incluir un vigoroso y extenso proceso de agitación y los resultados fueron comparados con dos protocolos comúnmente utilizados: fenol/cloroformo/alcohol isoamílico y el mismo kit QIAGEN. La cantidad del ADN extraído fue observado en electroforesis horizontal en geles de agarosa, y la calidad evaluada mediante la amplificación y visualización de los tamaños esperados de los microsatélites YWLL46 y LCA19. Aunque se logró extraer ADN con los tres métodos, solamente el método modificado permitió obtener ADN de suficiente calidad para ser utilizado en pruebas moleculares. Palabras clave: extracción de ADN, heces, vicuña ABSTRACTAt present, the use of DNA extracted from non-invasive samples, especially feces, is common practice in the discipline of conservation genetics. Even though DNA analysis is often difficult mainly due to the composition and preservation of feces has been

Aportes de la genética de la conservación al estudio de los mamíferos neotropicales: revisión y análisis crítico

“…Particularmente, para los mamíferos se han realizado distintos esfuerzos por optimizar la obtención de ADN a partir de pelos y heces. Siguiendo esta línea, se pusieron a punto trampas de pelo para distintas especies (Castro-Arellano et al 2008;Biondo et al 2010;García-Alaniz et al 2010) y se propusieron protocolos para aumentar la eficiencia de las extracciones de ADN a partir de heces mediante la remoción de los inhibidores que éstas contienen (Hebert et al 2011;Nardelli et al 2011;Panasci et al 2011;Maturrano et al 2012). Por otro lado, Gomes Rocha et al (2015) lograron recientemente recuperar ADN de pequeños mamíferos a partir de huesos presentes en egagrópilas de la lechuza común, Tyto alba.…”

Sexaje Molecular a Partir de Heces en Osos de Anteojos (Tremarctos ornatus)

“…Estas muestras pueden ser sometidas a pruebas moleculares debido a que contienen células exfoliadas del colon de las que se puede extraer material genético. (Maturrano, 2012) Sin embargo, no existe en la actualidad una técnica desarrollada para analizar muestras de heces del oso de anteojos que permita obtener ADN de calidad y cantidad que permita realizar análisis moleculares, como la determinación del sexo. Es por ello que el objetivo principal del presente estudio fue acondicionar una prueba molecular que permita sexar al oso de anteojos utilizando ADN extraído de muestras de heces mediante PCR.…”

“…Contar con esta técnica podría permitir en el futuro determinar la proporción hembras/machos en animales de vida libre, estimar el número de animales en una determinada región, así como la estructura y/o dinámica de una población (Maturrano, 2012 (Cuesta, 2005). Es el único 'oso de cara corta' y poseedor de manchas blanco amarillentas de forma circular alrededor de sus ojos, lo cual lo hace conocido como el oso de anteojos.…”