The Steindachneridion parahybae is an endangered catfish from Brazil and strategies applied for gametes optimization are necessary. The aim of this study was to assess inseminating doses and water volume upon the fertilization, hatching rates and percentage of normal larvae in S. parahybae. Was used a randomized design in factorial scheme (4×4) with four inseminating doses: 1.0×10 4 , 1.0×10 5 , 1.0×10 6 , 1.0×10 7 spermatozoa oocyte -1 and four volumes of water: 1, 35, 65 and 95mL of water g -1 of oocytes. The combination of doses and volumes were performed in triplicates (n=48). Each incubator (1.5L of useful volume) with 1g of oocytes was considered as an experimental unit. Significant interaction between inseminating doses and volumes of water to the values of the fertilization rates and quadratic effect of doses and volume for the values of hatching rates were observed. The doses and volumes did not influence the percentage of normal larvae (87.70±5.06%). It is recommended the use of 5.5×10 6 spermatozoa oocyte -1 and 1mL of water g -1 of oocytes during in vitro fertilization procedure. These results allowed us to develop new biotechnological strategies applied to the conservation of S. parahybae.O Steindachneridion parahybae é um bagre ameaçado de extinção no Brasil e estratégias aplicadas para a otimização de gametas são necessárias. O objetivo deste estudo foi avaliar doses inseminantes e volume de água sobre os valores das taxas de fertilização, eclosão e larvas normais em S. parahybae. Utilizando-se um delineamento experimental casualizado em esquema fatorial (4×4), com quatro doses inseminantes: 1,0×10 4 ; 1,0×10 5 ; 1,0×10 6 ; 1,0×10 7 espermatozóides ovócito -1 e quatro volumes de água: 1; 35; 65 e 95mL de água g -1 de ovócitos. As combinações de doses e volumes foram realizadas em triplicatas (n=48). Cada incubadora (1,5L de volume útil) contendo 1g de ovócitos foi considerada como uma unidade experimental. Interações significativas entre doses inseminantes e volumes de água para os valores das taxas de fertilização e efeito quadrático das doses e do volume para os valores das taxas de eclosão foram verificadas. As dosagens e os volumes aplicados não influenciaram no percentual de larvas normais (87,70±5,06). Recomenda-se a aplicação de 5,5×10 6 espermatozoides ovócito -1 e a utilização de 1mL de água.g -1 de ovócitos no procedimento de fertilização artificial in vitro. Estes resultados permitiram desenvolver novas estratégias biotecnológicas aplicadas na conservação do S. parahybae.