Padronização da metodologia do RT-PCR utilizado para identificação do mRNA da a-amilase em sementes de milho

Abstract

C por 5 minutos. O produto do RT-PCR apresentou uma banda de 249 pares de base (pb) bem definida, para as duas cultivares estudadas, não ocorrendo bandas inespecíficas. A técnica do RT-PCR mostrou ser uma metodologia eficiente para a identificação da expressão de α-amilase durante a germinação das sementes e pode ser usado para estudo qualitativo e quantitativo da cinética de síntese dessa enzima em experimentos de germinação.Termos para indexação: Zea mays, sementes, α-amilase, RT-PCR. RT-PCR PATTERNING FOR α-AMYLASE MESSENGER RNA IDENTIFICATION IN GERMINATING MAIZE SEEDSABSTRACT -During germination the seed reserve carbohydrates are degraded by α-amylase activity. The identification of mRNA is a very important tool for definition of α-amylase synthesis kinetics. This study aimed to adapt a PT-PCR methodology for α-identification of amylase mRNA in germinating maize seeds. After three days germination of Saracura BRS4154 and CATI AL34 maize cultivars, the total RNA was isolated by the guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction method, with some modifications. The cDNA was obtained from the total RNA, using random primers. The α-amylase gene PCR amplification was carried out with cDNA, primers (sense -CGACATCGACCACCTCAAC; antisense -TTGACCAGCTCCTGCCTGTC); gelatina; DMSO and 1,25 units of Taq

Protocolos De Extração De Rna E Atividade Enzimática Em Sementes De Pimenta

“…A pesquisa na área de biologia molecular, associada ao controle de qualidade de sementes, tem evoluído rapidamente e novas técnicas têm-se mostrado úteis na obtenção de classes distintas de marcadores moleculares. Estes auxiliam na elucidação dos fatores que afetam a qualidade, a manipulação, a identificação e a preservação do material genético, permitindo o monitoramento de todo o processo produtivo (DANTAS et al, 2002).…”