Eine Echtzeit-Beobachtung der Aktivitätder Sauren Sphingomyelinase (ASM) ist notwendig zur Aufklärung ihrer Rolle in Lipid-Signaltransduktionsprozessen. Mithilfe von Phosphorodichloridat-Chemie gelang die Synthese von fluoreszierenden Phosphosphingolipiden mit der Fähigkeit zum FRET.D iese Sphingomyelin-Analoga sind Substrate fürd ie rekombinante humane ASM und ermçglichen die Verfolgung der ASM-Aktivitätm ittels Fluoreszenzspektroskopie.I nkubation mit Zell-Lysaten von Wildtyp-u nd Knockout-Mäusen zeigte eine ausschließlicheS paltung durchA SM. Darüber hinaus nutzten wir systematisch die Umgebungsempfindlichkeit der Fluorophore,u ms ignifikante Zuwächsei nd er Responsivitätz ue rzielen. Die dabei angewendeten Konzepte kçnnten auch füra ndere zukünftige Lipase-Sonden zum Einsatz kommen. Eine mikroskopische Abbildung der ASM-Aktivitäti nl ebenden Zellen wurdem ittels Zweiphotonenanregung realisiert. Hintergrundinformationen zu diesem Beitrag sind unter: http://dx.doi.org/10.1002/ange.201611706 zu finden.
Angewandte ChemieZuschriften Abbildung 3. Mikroskopische Abbildungvon WT-(oben) und OE-MEF-Zellen (unten), die mit 1 mm der Sonde 2 über die angegebenenZeiträume inkubiert wurden. Gezeigt sind NBD-(grün) und MCC-Fluoreszenz (magenta) nach Zweiphotonenanregung (730 nm). Weiße Pixel zeigen Kolokalisation an. Alle Skalen sind gleich, der rote Balken entspricht 50 mm.