Preparation of honey bee specimens for histopathological studies, including a technique for the preparation of whole sections

Abstract

The typical techniques used to create pathological specimens of honey bee (Apis mellifera) in order to observe targeted organs are fixation, sectioning, and staining. However, these processes require a stereo microscope, cuticle scissors, scalpel and watchmaker's forceps, as well as advanced skills for extracting the desired organ. In this study, an embedding technique used to prepare specimens of sand fly (Phlebotominae) for histological studies is used instead of the conventional method. Placing the entire honey bee into Bouin's fixative with vacuum infiltration and butanol clearing was shown to create highly satisfactory specimens. Without the use of special reagents and equipment, the entire body is preserved in perfect condition, allowing easier identification of the internal organs.Preparación de muestras de abejas melíferas para estudios histopatológicos, incluyendo una técnica para la preparación de secciones enteras Resumen Las técnicas clásicas utilizadas para generar muestras patológicas de abejas melíferas (Apis mellifera) a fin de observar órganos específicos son la fijación, el seccionado y la tinción. Sin embargo, estos procesos requieren de un microscopio estereoscópico, tijeras para cutículas, bisturí y pinzas de relojero, así como avanzadas habilidades para la extracción del órgano deseado. En este estudio, en lugar de usar el método convencional, se ha empleado una técnica de incrustación usada en la preparación de muestras en estudios histológicos de moscas de la arena (Phlebotominae). Se demostró que la colocación de toda la abeja en el fijador de Bouin con infiltración de vacío y limpieza con butanol proporciona muestras altamente satisfactorias. Todo el cuerpo se conserva en perfecto estado sin el uso de reactivos y equipos especiales, lo que permite una identificación más fácil de los órganos internos. Downloaded by [Deakin University Library] at 08:37 11 August 2015 GRAAF, D; RIBIÈRE, M; RYABOV, E; DE SMET, L VAN DER STEEN, J J M (2013) Standard methods for virus research in Apis mellifera. In V Dietemann; J D Ellis; P Neumann (Eds) The COLOSS BEEBOOK, Volume II: standard methods for Apis mellifera pest and pathogen research. Journal of Apicultural Research, 52(4): http://dx.

A practical approach to the sampling, fixation, softening, and sectioning of whole honey bees for histologic evaluation

“…1,3 Fixatives other than 10% neutral-buffered formalin (NBF, “formalin”) described in the honey bee literature used for histologic purposes include other formaldehyde-based formulations, such as Bouin fixative. 12,34 Considerations in selecting a fixative include access or availability, safety of the fixative, and post-fixation applications (e.g., light vs. electron microscopy; immunofluorescence; immunohistochemistry). For example, Bouin fixative produces crisp staining of delicate tissues with superior staining quality.…”