Presentación diferencial de ARN mensajeros e identificación del gen selenocisteína liasa en células de carcinoma hepatocelular con expresión transitoria de la proteína core del virus de la hepatitis C.

Abstract

Introducción. El virus de la hepatitis C se asocia a diversas hepatopatías como hepatitis aguda, hepatitis crónica, esteatosis, cirrosis y carcinoma hepatocelular. Numerosos estudios han explorado mecanismos virales implicados en el establecimiento de la infección persistente y en las propiedades oncogénicas e inmunomoduladoras de la proteína core del virus de la hepatitis C. Las investigaciones orientadas a evaluar los cambios en la expresión de genes celulares endógenos inducidos por la proteína core son importantes para identificar genes candidatos responsables de los mecanismos de patogenicidad del virus de la hepatitis C. Objetivos. Comparar perfiles de expresión e identificar genes celulares endógenos en la línea celular derivada de carcinoma hepatocelular humano, HepG2, con expresión transitoria de la proteína core del virus de la hepatitis C. Materiales y métodos. Se utilizó la técnica de presentación diferencial de ARN mensajero por RT-PCR en células HepG2 con y sin expresión transitoria de la proteína core del virus de la hepatitis C o de la proteína verde fluorescente, obtenidas previamente con el sistema de expresión del Semliki Forest Virus, mediante transducción de partículas recombinantes rSFVCore o rSFV-GFP. Resultados. Se observaron diferencias en las intensidades de las bandas de ARNm expresadas en células HepG2 transducidas con rSFV-Core comparadas con células sin transducir y trasducidas con rSFV-GFP. Un ARNm de 258 pb expresado diferencialmente en células HepG2 transducidas con rSFV-Core fue clonado e identificado como selenocisteína liasa. Conclusión. Los resultados confirman que la expresión de la proteína core del virus de la hepatitis C se asocia con cambios en la expresión de ARN mensajeros específicos, incluido al gen selenocisteina liasa, el cual puede estar involucrado en la fisiopatología del carcinoma hepatocelular.

Selenocysteine β-Lyase: Biochemistry, Regulation and Physiological Role of the Selenocysteine Decomposition Enzyme

“…Notably, gene expression of SEPHS2 was also severely downregulated by chronic hypoxia, a correlation that suggests limiting Sec-tRNA [Ser]Sec loading is occurring, which could explain the downregulation of most selenoproteins observed [71]. Interestingly, infection of the same cell line with the core protein of the hepatitis C virus revealed SCLY to be the gene most differentially expressed using a differential display RT-PCR technique [72]. Since hepatocellular carcinoma after chronic infection with hepatitis C virus is a condition known to decrease cellular availability of selenium [73], it could be possible that SCLY is responding to diminished selenium levels after infection, and not to the viral infection itself.…”

Identification of Proteins Interacting with Selenocysteine Lyase

“…Aside from the potential role of SCL in selenoprotein synthesis, recent studies indicate that the expression of SCL is upregulated in acute glomerulonephritis, 4) and SCL is possibly involved in the pathophysiology of hepatocellular carcinoma. 5) SCL shares significant sequence similarity with cysteine desulfurases, which remove the sulfur atom of L-cysteine to form an enzyme-bound cysteine persulfide intermediate, which in turn serves as a sulfur donor to a wide variety of sulfur-containing biomolecules. 6,7) A similar mechanism involving an enzyme-bound cysteine perselenide intermediate has also been proposed for the SCL reaction (Kurokawa S, Mihara H, and Esaki N, unpublished results).…”

“…Considering the significant similarities in structure and catalytic mechanisms between SCL and cysteine desulfurase, the in vivo function of SCL is possibly modulated by partner interacting proteins. Since SCL has been implicated in selenoprotein biosynthesis, 3) glomerulonephritis, 4) and hepatocellular carcinoma, 5) a study of SCL-interacting proteins should shed light on the physiological significance of the enzyme in these biological processes and diseases. Hence we set out to identify proteins that interact with SCL.…”