Enzim selulase adalah enzim yang berperan dalam katalisis reaksi hidrolisis selulosa menjadi glukosa. Enzim ini dapat diisolasi dari keong sawah Pila ampullacea menggunakan substrat selulosa alami dari serbuk gergaji kayu.Tujuan penelitian ini adalah mengisolasi dan menentukan kondisi optimum selulase dari keong sawah. Penelitian diawali dengan persiapan substrat serbuk gergaji dengan cara delignifikasi menggunakan NaOH 2%. Selanjutnya mengisolasi enzim selulase dari hepatopankreas keong sawah melalui teknik destruksi, homogenisasi dan sentrifugasi. Penelitian dilanjutkan untuk memurnikan selulase melalui pengendapan protein selulase menggunakan amonium sulfat (NH4)2SO4 pada berbagai tingkat kejenuhan 10%, 20%, 30%, 40%, 60%, 80%. Pemurnian tahap berikutnya dilakukan dengan cara dialisis menggunakan membran selofan. Aktivitas selulase diperoleh dengan menghitung kadar glukosa sebagai produk hidrolisis dari substrat selulosa (serbuk gergaji) menggunakan metode Nelson-Somogy, sedangkan kadar protein ditentukan dengan metode Lowry dengan menggunakan bovine serum albumin (BSA) sebagai standar. Enzim selulase dari keong sawah mencapai aktivitas maksimum pada kondisi optimum: konsentrasi substrat (serbuk gergaji) 2% (b/v), pH 5,8, suhu 40 ᵒC, konsentrasi enzim 7,2 mg/mL. Kata Kunci: Selulase, keong sawah, Pila ampullacea, serbuk gergaji, isolasi, karakterisasi