Producción y evaluación del antígeno recombinante Tes-30 de Toxocara canis para el inmunodiagnóstico de toxocariasis

Abstract

: desarrollo de experimentos Jorge H. Botero: asesoría en el análisis estadístico Edwin B. Patiño: asesoría en la purificación de proteínas Juan F. Alzate: coordinación general del proyecto Todos los autores participaron en la escritura del manuscrito. Producción y evaluación del antígeno recombinante TES-30 deToxocara canis para el inmunodiagnóstico de toxocariasis Introducción. Toxocara canis es un nematodo patógeno de cánidos que accidentalmente puede ser transmitido a los humanos. A pesar de la importancia de la serología para el diagnóstico de esta zoonosis, los kits diagnósticos usan antígenos crudos de excreción-secreción, en su mayoría glucoproteínas que no son específicas de especie, por lo cual pueden presentarse reacciones cruzadas con anticuerpos generados contra otros parásitos. Objetivos. Producir el antígeno recombinante TES-30 de T. canis y evaluarlo para el inmunodiagnóstico de la toxocariasis. Materiales y métodos. Se clonó el gen que codifica TES-30 en el vector de expresión pET28a (+), usando oligonucleótidos de cadena sencilla unidos mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La proteína rTES-30 se purificó por cromotografia de afinidad (Ni 2+ ). La reacción serológica de rTES-30 se evaluó mediante immunoblot. Teniendo en cuenta que no existe una prueba de referencia, se observó el comportamiento del antigeno en comparación con la prueba de rutina para el inmunodiagnóstico de la toxocariasis, es decir, la técnica ELISA convencional con antígenos de excreción-secreción.Resultados. El rTES-30 se produjo a partir de un cultivo de Escherichia coli LB, con un rendimiento de 2,25 mg/l y 95 % de pureza. La concordancia de la reacción entre el immunoblot rTES-30 y la ELISA convencional, fue de 73 % (46/63) y de 100 % con los 21 sueros no reactivos. De los 21 sueros con diagnóstico de otras parasitosis, 19 fueron reactivos con ELISA, mientras que tan solo siete fueron positivos con el immunoblot rTES-30. La concordancia entre la ELISA y el immunoblot fue moderada (índice kappa de 0,575; IC 95% 0,41-0,74). Conclusiones. Los datos presentados respaldan la utilidad del immunoblot rTES-30 para la confirmación de los posibles positivos por ELISA, no solo en los estudios epidemiológicos, sino también, como candidato para el desarrollo de pruebas diagnósticas de la toxocariasis ocular en Colombia.Palabras clave: Toxocara canis, toxocariasis/diagnóstico, antígeno, pruebas inmunológicas.doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v36i1.2617 Production and evaluation of the recombinant antigen TES-30 of Toxocara canis for the immunodiagnosis of toxocariasisIntroduction: Toxocara canis is a pathogenic nematode of canines which can be accidentally transmitted to humans. Although serology is the most important diagnostic tool for this zoonosis, diagnostic kits use crude excretion/secretion antigens, most of them being glycoproteins which are not species-specific and may cross-react with antibodies generated against other parasites. Objectives: To produce the rTES-30 recombinant antigen of Toxocara canis and...

Urticaria and silent parasitism by Ascaridoidea: Component-resolved diagnosis reinforces the significance of this association

“…Investigations of Spanish and Italian patients allergic to Anisakis demonstrated that Ani s 1 is the immunodominant specific allergen, and the quantification of IgE specific to Ani s 1 is able to discriminate between asymptomatic and allergic patients [51,63]. Several authors have also demonstrated that some lectins, such as TES-32, are immunodominant components for diagnostic purposes [73,74]. Yamasaki and colleagues reported an increase in specificity when they used the recombinant antigen in comparison with larval crude extract.…”

Evaluation of new Toxocara canis chimeric antigens as an alternative to conventional TES-Ag for anti-Toxocara antibodies detection

“…Group 1: 21 negative control serum samples from apparently healthy individuals who have no precedent of living with domestic canines and double-negative in serial stool sampling tests for microscopic parasite examination and negative reactivity in an in-house IgG TES-ELISA previously developed and reported by Olave and colleagues in a T. canis reactivity study [ 41 ].…”

“…Group 4: 47 serum samples were obtained from patients with suspected toxocariasis based on clinical symptoms and signs (45 patients with OLMS suspicion and 2 patients with OLMS/VLMS suspicion). From this group, 43 samples were confirmed as positive for reactivity using the in-house IgG TES-ELISA [ 41 ].…”

“…For this reason, diverse studies in T. canis molecular biology have been focused on the identification and characterization of antigenic proteins with potential application as recombinant candidates for vaccination and immunodiagnostic studies. In this way, TES-26 (Tc-PEB-1), TES-32 (TES-30 or Tc-CTL-1) [ 33 , 34 ], TES-120 (Tc-MUC-1), and Myosin heavy chain have been characterized to the molecular level, synthesized as individual recombinant proteins and evaluated in ELISA/immunoblot for anti- Toxocara antibodies detection [ 35 , 36 , 37 , 38 , 39 , 40 , 41 , 42 , 43 ]. These recombinant antigens have been described as reliable, specific, and good candidates to replace native TES antigens.…”

Parásitos en arenas de parques públicos de Ciudad del Este – Alto Paraná, Paraguay, 2019-2020

“…El diagnóstico de la enfermedad se puede realizar con un examen patológico de los diversos órganos afectados, sin embargo, por ser un método invasivo no se recomienda su uso de forma rutinaria, debido a esto, existen otras pruebas diagnósticas como el examen de materia fecal, en donde se busca identificar los huevos mediante el microscopio. La prueba diagnóstica más utilizada en la actualidad es la de ELISA con antígenos de excreción-secreción (Noriega Céspedes, 2019; Olave et al, 2015;Vargas Morellano, 2015).…”