Production and Purification of Protease by Fungus Isolated From the Brazilian Dry Tropical Forest(caatinga)

Abstract

A demanda industrial por enzimas proteolíticas tem estimulando a busca por novas fontes de enzimas. As enzimas fúngicas são preferidas sobre as enzimas bacterianas, por serem mais eficazes e fáceis de extrair. O objetivo deste trabalho foi à purificação de proteases produzidas na fermentação em estado sólido por Mucor subtilissimus UCP 1262. O extrato bruto foi analisado utilizando 3 atividades proteolíticas diferentes, atividade colagenolítica (161,4 U/ml), queratinolítica (39,6 U/ ml) e fibrinolítica (26,1 U/ml). Após precipitação com sulfato de amônio, as frações ativas com atividade fibrinolítica foram dialisadas em tampão Tris-HCl 15 mM, pH 8, carregadas na coluna de troca iônica DEAE-Sephadex A50 e gel filtração (Superdex 75 HR10/300). A enzima purificada mostrou atividade frente a um substrato cromogênico de quimotripsina, a SDS-PAGE mostrou uma protease fibrinolítica com massa molecular de aproximadamente 70 kDa, e uma atividade específica de 25,93 U/mg. Essas características sugerem que a enzima pode ser produzida de forma rentável e eficiente para uso na terapia trombolítica.