Production, purification and characterization of an extracellular inulinase from Kluyveromyces marxianus var. bulgaricus

Inulinase production by yeat Kluyveromyces marxianus

“…3.2.1.7), comúnmente conocida como inulinasa, perteneciendo al grupo de clasificación de enzimas hidrolasas glicosidasas (Kushi et al, 2000;Laloux et al, 1991).…”

“…bulgaricus fue evaluada primero en cultivo continuo en medios con diferentes fuentes de carbono, en que los más altos rendimientos de inulinasa fueron obtenidos con sacarosa como sustrato limitante, resultando valores de 107 U/ml para una velocidad de dilución de 0.05 h -1 y 0.81 U/ml para un valor de 0.45 h -1 , precisándose que los niveles de actividad de inulinasa en cultivos con sacarosa fueron fuertemente dependientes de la velocidad de dilución y la levadura regulada por el azúcar residual en el cultivo continuo. Después en cultivos en matraces de 250 ml, 50 ml de medio a 30 ºC, velocidad de agitación 200 rpm, después de 72 horas y de las respectivas etapas de purificación se alcanzaron actividades específicas con inulina de 170 U/mg, la más alta, respecto con fructosa 94.2 U/mg, o con glucosa 59.5 U/mg o con sacarosa 35.5 U/mg (Kushi et al, 2000). Kalil et al (2001) en un estudio de optimización de la producción de inulinasa por Kluyveromyces marxianus ATCC 16045 determinaron que las condiciones de cultivo fueron: 14 g/l de sacarosa, 10 g/l de extracto de levadura, 20 g/l de peptona, 1 g/l de K 2 HPO 4 y pH 3.5.…”

“…3.2.1.7) es una enzima miembro de la familia de glicósido hidrolasa 32(GH32), la cual catalisa la hidrólisis de inulina a fructosa. La purificación de inulinasa microbiana extracelular es hecha por métodos convencionales de centrifugación, ultrafiltración, precipitación con solventes o sales, cromatografía de intercambio iónico y de permeación en gel, mientras que las inulinasa intracelular requiere disrupción celular antes de practicar los métodos reportados para las enzimas extracelulares (Kushi et al, 2000).…”

“…bulgáricus varía de 57 a 77 KDa (Kushi et al, 2000) y para K. marxianus CBS 6556 se determinó un valor de 64 KDa (Rouwenhorst et al, 1990).…”

“…Kushi et al (2000) determinaron los valores de los parámetros cinéticos aparentes K m y V max de la inulinasa purificada por HPLC de Kluyveromyces marxianus var. bulgaricus ATCC 16045 en presencia de inulina y sacarosa siendo 86.9 mg/ml y 53.7 U/mg de proteína y 4.58 mg/ml y 441.0 U/mg de proteína a 55 ºC y pH 4.4 óptimos, respectivamente, demostrando que la enzima producida es una exo-inulinasa con más alta afinidad y reactividad por la sacarosa que por la inulina.…”