Protective Role of Putrescine against Picloram Induced Genomic Instability and DNA Methylation in Phaseolus vulgaris

Abstract

Picloram (4-amino-3-5-6-trichloropicolinic acid) is an important synthetic auxin and it is one of the most widely used herbicides in agriculture. The use of picloram is representing a potential hazardous to ecosystems and the human health. Putrescine is a kind of polyamine which has a role in plant metabolism such as protecting membrane stability, removing free radicals and nucleic acid and protein synthesis, etc. In this study, DNA damage levels in Phaseolus vulgaris treated with picloram, DNA methylation changes and whether putrescine was any alleviative impact on these alterations were investigated. DNA methylation pattern changes and DNA damage levels were determined by using Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPDs) and Coupled Restriction Enzyme Digestion-Random Amplification (CRED-RAs), respectively. The obtained results indicated that all doses of picloram (5, 10, 20 and 40 mg L -1 ) had a negative effect on RAPDs profile changes (increased DNA damage levels) and decreased of Genomic Template Stability (GTS) and also DNA hypomethylation was seen. However, all concentrations of putrescine (0.01, 0.1 and 1 ppm) reduced these harmful effects of picloram. Consequently, putrescine can be an alternative for reducing genotoxic damage against chemical mutagens in plants.Keywords: DNA methylation, genomic instability, picloram, putrescine ÖZET: Pikloram (4-amino-3-5-6-trikloropikolinik asit) önemli bir sentetik oksin olup, tarımda en çok kullanılan herbisitlerden biridir. Pikloram kullanımı, ekosistem ve insan sağlığı için potansiyel bir tehlike oluşturmaktadır. Bir poliamin çeşidi olan putresinin bitki metabolizmasında; membran stabilitesinin korunması, serbest radikallerin uzaklaştırılması ve nükleik asit ve protein sentezi gibi rolü vardır. Bu çalışma, pikloram uygulanan Phaseolus vulgaris' teki DNA hasar düzeyleri ve DNA metilasyon değişiklikleri ile putresinin bu değişimler üzerinde koruyucu etkisinin olup olmadığının belirlenmesini amaçlamıştır. DNA hasar düzeylerini ve DNA metilasyon değişimlerini belirlemek için Rastgele Çoğaltılmış Polimorfik DNA (RAPD) ve Çift Restriksiyon Enzim KesimiRastgele Çoğaltım (CRED-RA) kullanılmıştır. Sonuçlar, tüm pikloram dozlarının (5, 10, 20 ve 40 mg L -1 ) RAPD profil değişikliklerini (DNA hasarının) artırdığını ve Genomik Kararlılık Stabilitesini (GTS) azalttığını ve ayrıca DNA hipometilasyonunun oluştuğunu göstermiştir. Bununla birlikte, kullanılan tüm putresin konsantrasyonları (0.01, 0.1 ve 1 ppm) putresinin bu zararlı etkilerini azaltmıştır. Sonuç olarak, putresin, bitkilerdeki kimyasal mutajenlere karşı genotoksik hasarı azaltmak için bir alternatif olabilir.