Protein refolding at high pressure: Optimization using eGFP as a model

Malavasi, N.V.; Foguel, Débora; Bonafé, Carlos Francisco Sampaio; Braga, Carolina A.; Chura-Chambi, Rosa Maria; Vieira, J. M. Pereira; Morganti, Lígia

doi:10.1016/j.procbio.2010.10.002

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“…However, there are also articles in the literature that indicate that protein folding occurs during incubation at lower pressure levels (0.3-0.7 kbar) [13,27] or at atmospheric pressure [9]. To determine the conditions that favor TsnC refolding, IB suspensions were subjected to incubation at 2.4 kbar for 16 h. As alternative conditions, the IB suspensions were compressed at 2.4 kbar for 90 min for dissociation of the aggregates, which was followed by decompression to 0.8, 0.4, 0.2 kbar or 1 bar for refolding, condition that was maintained for 16 h before complete decompression and dialysis.…”

Section: Effect Of Incubation At Different Pressure Levels On Tsnc Rementioning

confidence: 99%

“…Therefore, the use of 2-3 kbar constitutes a non-denaturing technique that solubilizes aggregates and keeps the secondary and tertiary protein structure intact, being potentially applicable in protein refolding [9,10]. In this context, HHP has become a technique to obtain high-yield protein refolding [11][12][13][14]. Quantification of the target protein in the soluble fraction often aids determination of the refolding process efficiency [15,16].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

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Investigation on solubilization protocols in the refolding of the thioredoxin TsnC from Xylella fastidiosa by high hydrostatic pressure approach

Lemke

Chura-Chambi

Rodrigues

et al. 2015

Protein Expression and Purification

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Section: Effect Of Incubation At Different Pressure Levels On Tsnc Rementioning

confidence: 99%

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Investigation on solubilization protocols in the refolding of the thioredoxin TsnC from Xylella fastidiosa by high hydrostatic pressure approach

Lemke

Chura-Chambi

Rodrigues

et al. 2015

Protein Expression and Purification

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“…The refolding of oligomers present the additional drawback that is the necessity of high protein concentration, a condition that potentially induce the association of misfolded monomers and that can favor reaggregation instead of the proper association of the monomers. HHP was previously described to be a useful tool for solubilization of aggregated proteins, enabling for the refolding of monomeric (Chura-Chambi et al, 2008Fraga et al, 2010;Malavasi et al, 2011) and oligomeric proteins (Foguel et al, 1999).…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Effect of pressure on refolding of recombinant pentameric cholera toxin B

Rodrigues

Farinha-Arcieri

Ventura

et al. 2014

Journal of Biotechnology

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The production of recombinant proteins is an essential tool for the expansion of modern biological research and biotechnology. The expression of heterologous proteins in Escherichia coli often results in an incomplete folding process that leads to the accumulation of inclusion bodies (IB), aggregates that hold a certain degree of native-like secondary structure. High hydrostatic pressure (HHP) impairs intermolecular hydrophobic and electrostatic interactions, leading to dissociation of aggregates under non-denaturing conditions and is therefore a useful tool to solubilize proteins for posterior refolding. Cholera toxin (CT) is composed of a non-toxic pentamer of B subunits (CTB), a useful adjuvant in vaccines, and a toxic subunit A (CTA). We studied the process of refolding of CTB using HHP. HHP was shown to be effective for dissociation of CTB monomers from IB. Posterior incubation at atmospheric pressure of concentrated CTB (1mg/ml) is necessary for the association of the monomers. Pentameric CTB was obtained when suspensions of CTB IB were compressed at 2.4kbar for 16h in the presence of Tween 20 and incubated at 1bar for 120h. Soluble and biologically active pentameric CTB was obtained, with a yield of 213mg CTB/liter of culture. The experience gained in this study can be important to improve the refolding of proteins with quaternary structure.

show abstract

“…A técnica tem se mostrado eficiente para a renaturação de diversas proteínas (FRAGA et al, 2010;MALAVASI et al, 2011;ZHENG et al, 2013;RODRIGUES et al, 2014;LEMKE et al, 2015) e, portanto, ela foi empregada na tentativa de renaturar as porções da proteína LepA388. Após diferentes condições para a renaturação, o tratamento com o tampão composto por 50 mM Tris-EDTA pH 8,0 e 500 mM de L-arginina pH 11,0 foi o mais eficiente para que a maior concentração das proteínas estivesse na fração solúvel (Figura 33 e Figura A6 da seção Apêndices).…”

Section: Discussionunclassified

Identificação e avaliação de novas adesinas em <i>Leptospira interrogans</i> por <i>shotgun phage display</i>

Ferreira¹

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Aos meus queridos pais e irmã, Reinaldo, Walquiria e Julianne, por todo amor, carinho, dedicação e apoio incondicional.Vocês são a luz do meu caminho. AGRADECIMENTOSAgradeço ao meu orientador, Dr. Paulo Lee Ho, pela oportunidade de trabalhar no Instituto Butantan, pela confiança depositada no meu trabalho e por todo o conhecimento compartilhado, sempre me mantendo motivada ao longo desses dois anos de Mestrado.Agradeço também ao Dr. Ricardo Giordano pelo envolvimento e auxílio essenciais para o desenvolvimento do meu projeto e pelo espaço cedido em seu laboratório. Em especial, agradeço ao seu aluno de Doutorado, André Teixeira, pela amizade, pelo trabalho em conjunto e por todas as discussões valiosas que ajudaram no andamento do meu Mestrado.Agradeço especialmente à doutora Ana por estar presente sempre que possível e por compartilhar sua experiência no projeto. Sua ajuda foi essencial para a realização do meu trabalho.A todos os membros do laboratório de Biotecnologia Molecular I, principalmente os pesquisadores Eliane, Léo, Jô, Enéas e Alessandra, por sempre estarem dispostos a me ajudar e me acompanhar em diversos momentos do meu trabalho. Muito obrigada por todo aprendizado e apoio.Às minhas queridas amigas e doutoras Luciane, Juliana e Cláudia por compartilhar suas experiências profissionais e pessoais, por me salvarem dos meus sufocos aparentemente sem solução e pela amizade dentro e fora do laboratório, que rendeu não só momentos tão bons e divertidos, como também reflexões sobre o meu futuro profissional.Às amigas e também mestrandas Marcela, Rafaella, Júlia e Rúbia pela amizade e compreensão, pelas conversas sérias e descontraídas, pelo apoio nos desabafos e nos resultados positivos e negativos, e pela companhia mesmo durante alguns experimentos noturnos.Às técnicas do laboratório, Aline, Nidia e Vera, por tornar o meu trabalho possível e mais simples. Agradeço por me ajudar a encontrar tudo no laboratório por tantas vezes e pelos momentos de descontração. Em especial, agradeço à Aline pelas inúmeras amostras para sequenciamento de última hora.Também deixo meu agradecimento às técnicas Marisa e Rosa do Biotério do Centro de Biotecnologia do Instituto Butantan e aos membros dos laboratórios de Biotecnologia Molecular II, III e IV por concederem o uso de equipamentos complementares.Agradeço especialmente à pesquisadora Ligia Morganti e sua equipe pela importante colaboração na fase final do projeto.Aos professores e funcionários do Instituto de Química, por todo auxílio e contribuição para o meu conhecimento de Bioquímica e Biologia Molecular.A todos os colegas e queridos amigos do IQ que conheci durante a pós-graduação e que tiveram papel fundamental nessa fase tão especial da minha vida: Carlos, Amanda, Ana Maria, Fabiana e Cícero.Às instituições que me forneceram suporte financeiro: à Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) pela concessão de bolsa na maior parte do meu curso de Mestrado, ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pela concessão das p...

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Protein refolding at high pressure: Optimization using eGFP as a model

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Investigation on solubilization protocols in the refolding of the thioredoxin TsnC from Xylella fastidiosa by high hydrostatic pressure approach

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Effect of pressure on refolding of recombinant pentameric cholera toxin B

Identificação e avaliação de novas adesinas em <i>Leptospira interrogans</i> por <i>shotgun phage display</i>

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