Quantification of polysaccharide Vi in the typhoid vaccine VaxTyViTM by sandwich ELISA using a monoclonal antibody.

Abstract

VaxTyVi® is a plain polysaccharide vaccine based on the capsular polysaccharide Vi (PsVi) from Salmonella Typhi, produced at Finlay Institute. Quantification of PsVi in VaxTyVi TM , is a mandatory requirement for final product release and has being made by inhibition ELISA. Considering the disadvantages of this type of ELISA and that recently our group obtained a MAb against PsVi, the aim of this work, was to develop a sandwich ELISA to quantify PsVi in VaxTyVi TM . M&M. Using MAb 4G3E11 as the capture and detection, a sandwich ELISA was developed. Limits of detection (LOD) and quantitation (LOQ) were calculated, as well as the inter-and intra-assay for each point of the standard curve. The PsVi content in six batches of VaxTyVi™ was also determined. Results. An eight-point calibration curve with a range from 50 to 0.39 ng/mL of PsVi was obtained with a coefficient of determination (R 2 ) ≥0.99. The LOD and LOQ were 0.59 ng/mL and 1.25 ng/mL respectively, representing at least 1000 times more sensitive than inhibition ELISA. The inter-assay CV was 4-15%, and the intra-assay CVs varied between 3-8 % and 4-9% for intraplate and interplate respectively. The PsVi content in all VaxTyVi™ lots were found into the accepted range (±30%). In summary, the proposed sandwich shown to be specific, reproducible and highly sensitive. The assay shown to be suitable for use in the quantitation of PsVi in VaxTyViTM, with great potential to replace the inhibition ELISA, implanted in the Finlay Institute since 2006.Keywords: polysaccharide Vi quantification, sandwich ELISA, Typhoid fever, monoclonal antibodies RESUMENVaxTyVi® es una vacuna simple polisacárida basada en el polisacárido capsular Vi (PsVi) de Salmonella Typhi, producido en el Instituto Finlay. La cuantificación de PsVi en VaxTyVi TM , es un requisito obligatorio para la liberación del producto final y se ha realizado mediante ELISA de inhibición. Teniendo en cuenta las desventajas de este tipo de ELISA y que recientemente nuestro grupo obtuvo un MAb contra PsVi, el objetivo de este trabajo, fue desarrollar un sándwich ELISA para cuantificar PsVi en VaxTyVi TM . Utilizando el MAb 4G3E11 como captura y detección, se desarrolló un ELISA en sandwich. Se calcularon los límites de detección (LOD) y la cuantificación (LOQ), así como el inter e intra-ensayo para cada punto de la curva estándar. También se determinó el contenido de PsVi en seis lotes de VaxTyVi ™. Se obtuvo una curva de calibración de ocho puntos con un intervalo de 50 a 0,39 ng / ml de PsVi con un coeficiente de determinación (R 2 ) ≥ 0,99. El LOD y LOQ fueron 0.59 ng / mL y 1.25 ng / mL respectivamente, lo que representa al menos 1000 veces más sensible que ELISA de inhibición. El CV inter-ensayo fue del 4-15%, y el CV intra-ensayo varió entre 3-8% y 4-9% para intraplaca e interplate, respectivamente. El contenido de PsVi en todos los lotes VaxTyVi ™ se encontró en el intervalo aceptado (± 30%). En resumen, el sandwich propuesto demostró ser específico, reproducible y altamente sensible. El ensayo de...