Reação à infecção pelo vírus da tristeza dos citros (CTV) em plantas transgênicas de laranja 'Hamlin' (Citrus sinensis (L.) Osbeck) expressando seqüências gênicas do CTV

Abstract

Reaction to Citrus tristeza virus (CTV) infection of transgenic 'Hamlin' sweet orange (Citrus sinensis (L.) Osbeck) plants transformed with CTV genetic sequences The Citrus tristeza virus (CTV) is one of the greatest threats to the citrus industry worldwide. In Brazil, CTV continues to cause damage through strong strains despite the use of techniques like cross-protection and substitution of intolerant rootstocks. With the appearance and spread of the Citrus Sudden Death disease in 1999 and its possible relation to CTV, this virus was again among important pathogens within the Brazilian citrus industry. One of the possible solutions for controlling virus diseases in fruit crops is the development of immune or resistant transgenic plants. The objective of this work was to evaluate the resistance to CTV of transgenic 'Hamlin' sweet orange plants containing three transgenic constructs obtained from CTV genomic sequences. The genetic constructs used aimed to activate RNAi defense routes (coat protein hairpin and a conserved sequence from CTV) and resistance mechanisms related to the coat protein expression. The transgenic plants were challenged with a weak strain of CTV, CTV-IAC, by bud and aphid (Toxoptera citricida Kirkaldy) inoculation. The evaluation of viral replication was done by ELISA analysis. The transgenic plants were considered susceptible to viral replication and translocation when bud inoculated. However, a few plants showed retardation of infection. It was not possible to determine resistance in the aphid transmission assay since the controls were not uniformly inoculated.

Avaliação de plantas transgênicas de laranja doce (Citrus sinensis) e transformação genética de laranja azeda (Citrus aurantium) para resistência ao Citrus tristeza virus (CTV)

“…Esta resistência mediada pelo RNA é específica para o vírus com seqüência homóloga ao transgene e pode conferir alto nível de resistência ou até a imunidade (TEPFER, 2002). O PTGS pode ser definido como uma série de processos celulares envolvidos na regulação da expressão gênica após a transcriçao pela degradação de seqüências específicas de mRNA ou do bloqueio de sua tradução (LU et al, 2003;SOUZA; LOUGH, 2001;BERNSTEIN et al, 2001;LU et al, 2003;VOINNET, 2005;ZERBINI;ALFENAS;ANDRADE, 2005;WATERHOUSE, 2006;SOUZA;.…”

“…As linhagens transgênicas avaliadas nesse trabalho foram caracterizadas molecularmente quanto à presença e transcrição dos transgenes em trabalhos anteriores (SOUZA, 2008;MUNIZ, 2008;MUNIZ et al, 2012 -JOSEPH et al, 1979;CAMBRA et al, 1990;SAPONARI;YOKOMI, 2008 Figura 2 -Avaliação da concentração de vírus por análises de ELISA, após 4 semanas da primeira inoculação com o CTV, de três clones de cada uma das linhagens transgênicas de laranja doce 'Hamlin' contendo as construções gênicas pCTV-CP, pCTV-SC ou pCTV-DS, enxertadas sobre laranja azeda ou limão 'Cravo'. -= planta de laranja doce 'Hamlin' não transgênica não inoculada com CTV (controle negativo); + = planta de laranja doce 'Hamlin' não transgênica inoculada com CTV por enxertia de borbulha (controle positivo); A = plantas de laranja doce 'Hamlin' enxertadas sobre laranja azeda utilizadas como controle da inoculação; B = plantas de laranja doce 'Hamlin' enxertadas sobre limão 'Cravo' utilizadas como controle da inoculação Figura 3 -Avaliação da concentração de vírus por análises de ELISA, após 4 semanas da primeira inoculação com o CTV, de três clones de cada uma das linhagens transgênicas de laranja doce 'Valência' contendo as construções gênicas pCTV-CP, pCTV-SC ou pCTV-DS, enxertadas sobre laranja azeda ou limão 'Cravo'.…”