As cefalosporinas são antibióticos utilizados no tratamento de infecções por bactérias Gram-negativas e Gram-positivas em ambiente hospitalar e ambulatorial. Assim, o objetivo principal deste trabalho consistiu em avaliar o impacto das cefalosporinas nos níveis de creatinina sérica em pacientes de um hospital em Natal, Brasil. Para isso, um estudo observacional, prospectivo, transversal e analítico foi idealizado, submetido e aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da instituição. Foram avaliados pacientes internados entre maio de 2019 e março de 2020, maiores de idade e em uso de medicação, enquanto pacientes críticos, grávidas ou em terapia antineoplásica ou imunossupressora foram excluídos. Na admissão, coletaram-se dados clínicos, prescrições medicamentosas e amostras de sangue para avaliação da creatinina sérica pela reação de Jaffé. Os resultados foram submetidos a análise estatística e in vitro. Aproximadamente, 10% dos pacientes estavam usando cefalosporinas, o que pode justificar a elevação nos níveis de creatinina sérica. Conforme o modelo de regressão múltipla, a administração de cefalosporinas aumentou os níveis de creatinina em 0,61 mg/dL (IC 95% 0,06 -1,15) e a ceftriaxona foi especificamente associada a um aumento de 1,0 mg/dL (IC 95% 0,32 -1,69). Ademais, a análise in vitro revelou um aumento de 8,3% nos níveis de creatinina sérica na presença de ceftriaxona, sugerindo que esse parâmetro, avaliado pelo método de Jaffé, pode estar falsamente elevado em pacientes hospitalizados que recebem cefalosporinas. Portanto, o estudo contribui com o estabelecimento de correlações clínicas entre o uso de cefalosporinas e alterações laboratoriais, cujos achados são escassos na literatura.