Recombinant Analogue of Varicella Zoster Virus Glycoprotein E: Cloning, Expression and Studying of AntigEn Properties

Abstract

We made recombinant antigen GE containing fragment of VZV glycoprotein E (Gly48 - Glu135) fused to E. coli beta-galactosidase and confirmed its antigen specificity by Western blotting and competitive-inhibition enzyme immunoassay (EIA) in comparison with commercial analogues and natural viral antigens. We showed interaction of recombinant GE protein with IgG antibodies from rabbits immunized by vaccine viral strain. GE protein also specifically reacted in ELISA with 66% of sera from zoster patients and 35% of sera from control groups including sera containing antibodies to other herpes viruses, sera from healthy donors, and sera from patients with different forms of intestinal disorders. Consequently, we demonstrated possibility of application of our recombinant GE VZV as antigen for diagnostics and research use.

Development of the ELISA Test System for Quantitative Determination of IgG to the Varizella zoster virus in Human Serum and Assessment of its Diagnostic Efficiency

“…Рекомбинантный антиген GE из коллекции ФГБНУ НИИВС им. И. И. Мечникова [7]. Набор реагентов для количественного опреде ления антител к ВВЗ методом ИФА «AntiVZV ELISA (IgG)» («Euroimmun», Германия, кат.…”

“…• Иммуносорбент (ИС) -разборный планшет для ИФА с пассивно иммобилизованным рекомби нантным антигеном GE ВВЗ; • Калибровочные пробы с концентрацией (МЕ/мл) АТ -ВВЗ: 50,0; 5,0; 1,0; 0,2; 0,0, стандартизиро ванные по ВОЗстандарту W1044; Для приготовления иммуносорбента выбран гликопротеин GE (ORF68) -самый иммуногенный среди гликопротеинов ВВЗ, стимулирующий гу моральный и клеточный иммунитет, обладающий высокой специфичностью и слабой перекрестной реактивностью, что было подтверждено прове денными ранее исследованиями [7,10,11]. При изучении сероконверсии АТ к различным анти генам ВВЗ [5] было показано, что у инфициро ванных лиц только к антигену GE ВВЗ с первых дней заболевания выявляли иммуноглобулины класса А, М и G. Уровень IgG был максимальным на 15й день заболевания и снижался до мини мума к 27 дню.…”

“…Используемый в раз работанной тестсистеме иммуносорбент получен на основе рекомбинантного белка GE ВВЗ. В ин струкции по применению тестсистемы сравнения указано, что источником антигена, использован ного при получении иммуносорбента, являлись инактивированные лизаты инфицированных штам мом «VZ10» ВВЗ клеток MRC5, и, таким образом, в результате проведения ИФА должны обнаружи ваться антитела ко всему спектру антигенов ВВЗ, в том числе к антигенам, содержащим общие эпи топы с антигенами других герпесвирусов [7]. Тем не менее, сравнительные испытания показали, что диагностическая эффективность тестсистемы, разработанной нами на основе только рекомби нантного антигена GE ВВЗ, не имеет статистически достоверных различий с коммерческим аналогом зарубежного производства.…”

“…Цель исследования -разработка не имеющей отечественных аналогов иммуноферментной тест системы для определения концентрации иммуно глобулинов класса G (IgG) к ВВЗ в сыворотке крови человека и оценка ее диагностической эффектив ности. В качестве антигенной основы использован Практические аспекты эпидемиологии и вакцинопрофилактики Practical Aspects of Epidemiology and Vaccine Prevention ранее полученный нами рекомбинантный антиген GE, содержащий слитый с βгалактозидазой E. coli фрагмент (Gly48 -Glu135) GE [7].…”