Penelitin ini bertujuan untuk mengetahui kualitas semen secara mikroskopis pada ayam kampung jantan yang disuplementasikan L-Arginine dan L-Lysine dalam pakan. Penelitian menggunakan 43 ekor ternak ayam kampung jantan umur 3 bulan dan pengambilan data pengambilan data diambil saat ayam berumur 5 bulan. Perlakuan yang diberikan terdiri dari T1: Pakan kontrol + L-Arginine 0,4 g + L-Lysine 0,6 g; T2: Pakan kontrol + L-Arginine 0,6 g + L-Lysine 0,6 g; T3: Pakan kontrol + L-Arginine 0,4 g + L-Lysine 0,8 g; dan T4: Pakan kontrol + L-Arginine 0,6 g + L-Lysine 0,8 g. Variabel yang diamati pada penelitian ini adalah motilitas, viabilitas, dan abnormalitas spermatozoa. Rataan nilai motilitas massa tertinggi terdapat pada perlakuan (T4) sebesar 2,6±0,93 dan motilitas individu nilai rataan tertinggi juga terdapat pada (T4) 80±13,32%, rataan tertinggi viabilitas terdapat pada (T2) sebesar 95±1,58%, dan rataan terendah abnormal terdapat pada (T1) sebesar 13,5±1,60%. Analisis statistik menunjukkan bahwa pemberian asam amino L-Arginine dan L-Lysine dengan level yang berbeda berpengaruh nyata terhadap viabilitas sedangkan pada motilitas massa; motilitas individu dan abnormal spermatozoa tidak berpengaruh nyata. Disimpulkan bahwa penggunaan L-arginine 0,6 g dan L-lysine 0,6 g yang disuplementasi dalam pakan ayam kampung berpengaruh nyata terhadap viabilitas spermatozoa sedangkan pada motilitas massa; motilitas individu dan abnormal spermatozoa tidak berpengaruh nyata.