RFX3 governs growth and beating efficiency of motile cilia in mouse and controls the expression of genes involved in human ciliopathies

Abstract

SummaryRFX3 governs growth and beating efficiency of motile cilia in mouse and controls the expression of genes involved in human ciliopathies

The deubiquitinating enzyme CYLD controls apical docking of basal bodies in ciliated epithelial cells

“…MEFs were obtained after trypsinization of dissected embryos at embryonic day 13.5 (E13.5) and grown in DMEM medium supplemented with 10% FCS and non-essential amino acids. Ependymal cell cultures were maintained as described previously 21,66 . Human embryonic kidney cells (HEK293T) from ThermoScientific were transiently transfected with plasmid DNA using the calcium phosphate precipitation method.…”

“…Serum starvation of cultured ependymal cells leads to the development of numerous motile cilia growing from these basal bodies 21 . Therefore, we cultured ependymal cells from mouse brains and stained them with antibodies against CAP350 and CYLD.…”

“…These results show that CYLD D932 , a truncated catalytically inactive protein, behaves as a dominant negative form of CYLD to inhibit formation of motile cilia in multiciliated cells, whereas complete absence of CYLD has no effect on cilia formation. As the decreased number of multiciliated trachea cells might be due to a developmental delay in the Cyld D932 embryo, we used the ependymal culture system 21 and compared motile cilia formation in parallel cell cultures obtained from WT and Cyld D932 littermates. There was no difference in the doubling time of cells with these different genotypes, but there was a dramatic difference in the number of multiciliated cells between WT and Cyld D932 cells, independently of cell-density variations (Fig.…”

Contrôle transcriptionnel des gènes ciliaires

“…Parmi les facteurs possédant un domaine de dimérisation, DAF-19 chez C. elegans et RFX-(CG6312) chez la drosophile jouent un rôle essentiel dans la formation des cils des neurones sensoriels [8,9]. Chez la souris, RFX3 est indispensable à l'élongation des cils du noeud embryonnaire [10] et des cellules des îlots de Langerhans du pancréas endocrine [11], ainsi qu'à la régulation du nombre, de la taille et de la motilité des cils dans les cellules épendymaires [12,13]. D'autre part, les souris déficientes pour Rfx4 présentent des défauts de croissance des cils au niveau du système nerveux central [14].…”

“…Cependant, Rfx3 ne semble pas être régulé par FOXJ1 dans le plancher du tube neural, qui porte de longs monocils dont la fonction est encore débattue [33]. À l'inverse, dans les cellules épen-dymaires de souris, RFX3 se lie au promoteur du gène Foxj1 [12], suggérant l'existence d'une régulation croisée entre ces facteurs de transcription. Il a également été montré que les facteurs RFX et FOXJ1 peuvent faire partie d'un même complexe transcriptionnel.…”