SENSITIVE DETERMINATION OF 3,4-DIHYDROXY-L-PHENYLALANINE BY A CLOUD FUNNEL MUSHROOM (Clitocybe nebularis (Batsch), P. Kumm.) HOMOGENATE-BASED AMPEROMETRIC BIOSENSOR

Abstract

3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA) is one of the precursor molecules for the biosynthesis of neurotransmitters in the brain. Monitoring of L-DOPA levels as a drug or biomolecule in biological fluids is crucial for the treatment of patients suffering from Parkinson's Disease. This study aimed to construct a cloud funnel mushroom (Clitocybe nebularis (Batsch), P. Kumm.) tissue homogenate-based biosensor for precise and sensitive detection of L-DOPA in artificial plasma and urine. For this purpose, in the fabrication of the biosensor, tissue homogenate of C. nebularis was immobilized into a carbon paste electrode by using graphite, mineral oil, gelatine and glutaraldehyde. The amperometric signals corresponding to 600 s were recorded as response current for each L-DOPA concentration. All amperometric measurements were carried out at ⁻700 mV (versus Ag|AgCl). The present biosensor successfully detected L-DOPA with a linear dynamic range at 2.5-100 µM and Limit of Detection (LOD) value as 0.76 µM, as well as standard deviation as ±0.41 µM and coefficient of variation as 0.82% (n=16). Additionally, the determination of L-DOPA spiked in artificial plasma and urine was carried out successfully. The present work would be the first study that utilized C. nebularis tissue as a biosensor component.Özet: 3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA), beyinde nörotransmitter sentezi için öncül moleküllerden biridir. Biyolojik sıvılarda, ilaç veya biyomolekül olarak L-DOPA düzeylerinin izlenmesi, Parkinson hastalığına sahip kişilerin tedavi süreci için önemlidir. Bu çalışmanın amacı, sentetik plazma ve idrar örneklerinde L-DOPA molekülünün doğru ve duyarlı bir tayinine yönelik, bulutlu huni mantarı (Clitocybe nebularis (Batsch), P. Kumm.) doku homejenatı temelli bir biyosensör sistemi geliştirmektir. Bu bağlamda, biyosensör yapımında, C. nebularis doku homojenatı; grafit, mineral yağ, jelatin ve glutaraldehit kullanılarak karbon pasta elektrot içine immobilize edilmişlerdir. 600. saniyeye karşılık gelen amperometrik sinyaller her L-DOPA konsantrasyonu için yanıt akımı olarak kaydedilmiştir. Tüm amperometrik ölçümler ⁻700 mV (vs Ag|AgCl) potansiyelinde gerçekleştirilmiştir. Geliştirilen biyosensör, L-DOPA molekülünü 2,5-100 µM tayin aralığında ve 0,76 µM tayin limitinin yanı sıra ±0,41 µM standart sapma (n= 16). ve %0,82 varyasyon katsayısı ile saptayabilmiştir. Ayrıca sentetik plazma ve idrar içerisine eklenmiş L-DOPA miktarının da tayini başarı ile gerçekleştirilmiştir. Bu çalışma C. nebularis dokusunun ilk kez bir biyosensör bileşeni olarak kullanıldığı çalışmadır.Protein assays via BSA and Coomassie Brilliant Blue G-250 were carried out according to the Standard Bradford method (Bradford 1976) for determination of the protein amounts of C. nebularis tissue homogenates.A modified version of the ABTS method described by Shin & Lee (2000) was used for determination of laccase activity of tissue homogenates. The absorbance values at 420 nm and 25°C of the assay mixture containing tissue homogenates (0.1 mL) and ABTS (0.9 mL) were