Signal Amplification-Based Techniques

Current Problems and Recent Advances in the Molecular Diagnosis of Genital Human Papillomavirus Infections

“…Sinyal amplifi kasyon sistemlerinde nükleik asitler ilk olarak özgün problarla hibridize edilir ve daha sonra bu komplekslerden üretilen sinyallerin derecesi artırılır 27 . Hybrid Capture (HC) 1 ve 2 (Digene, ABD), e NextGen (Qiagen, Almanya) ve Invader ASRs (Hologic, ABD) HPV tanısında kullanılan sinyal amplifi kasyonu prensibi ile çalışan ticari testlerdir [16][17][18] .…”

“…Sinyal amplifi kasyon testlerinin en önemli avantajları kolay uygulanabilirlikleri ve standardize edilmiş olmalarıdır. Bununla beraber, genotip düzeyinde tanımlama yapma ve çoklu enfeksiyonları tespit etme etkinliklerinin sınırlı olması yanında saptama limitlerinin de nispeten yüksek olması başlıca dezavantajlarıdır 8,27 . HPV tanısına yönelik ilk HC testi olan HC1 1995 yılında Digene tarafından geliştiril-miştir.…”

“…Tipe özgül hibridizasyonu takiben cleavase enzimi ile parçalanan problardan fl oresans oluşması prensibi ile çalışan kalitatif bir yöntemdir. Bu yöntemde teorik olarak 10 6 -10 7 kat amplifi kasyon artışı elde edildiği ve yöntemin saptama duyarlılığının 1000-10.000 kopya/ml olduğu bildirilmiştir 27 . Üç prob kokteylinin her birinde bulunan ve insan histon-2 genine bağlanan oligonükleotidler internal kontrol olarak işlev görür 11 .…”

Si̇nyal Ampli̇fi̇kasyon Tekni̇kleri̇ Ve Tanisal Vi̇roloji̇deki̇ Uygulamalari

“…Bu hastalıkların tanısı ve takibi için ya da herhangi bir numunedeki nükleik asit varlığının saptanması ve kantitasyonu için amplifikasyon temelli yaklaşımlara gereksinim duyulur (1)(2)(3). Amplifikasyon yaklaşımları çalışma prensiplerine göre genel olarak üç farklı grupta incelenir; (i) doğrudan hedef nükleik asitlerin çoğaltıldığı yöntemler, (ii) hedef nükleik asitlere bağlanan probların amplifiye edildiği yaklaşımlar ve (iii) hedef nükleik asitlerden üretilen sinyallerin amplifiye edilmesine dayalı teknikler (1,4). Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), loop-mediated amplifikasyon (LAMP), nükleik asit sekans bazlı amplifikasyon (NASBA) ve transkripsiyon aracılı amplifikasyon (TMA) teknikleri nükleik asit sekanslarının kopyalarını çoğaltmada kullanılan hedef amplifikasyon yöntemlerinden en yaygın kullanılanlarıdır (5,6).…”

“…Literatürde tanımlanmış olan sinyal amplifikasyon tekniklerinin en önemlileri; dallı DNA (bDNA; dallanmış DNA veya branched DNA), döngüsel prob (CP; cycling probe), hibrid yakalama (HC; hybrid capture), Invader yöntemi ve tiramid sinyal amplifikasyonu (TSA) teknikleridir (Tablo 1) (1,8). Son yıllarda bu tekniklere nanopartiküllerin kullanıldığı yeni sinyal amplifikasyon yöntemleri de eklenmiştir (9).…”