A geléia real é utilizada como suplemento alimentar, conhecido popularmente como rico em vitaminas B. Os objetivos do presente trabalho foram a determinação simultânea, por cromatografia líquida de alta eficiência, da tiamina (vitamina B 1 ), riboflavina (vitamina B 2 ) e piridoxina (vitamina B 6 ) e a comparação com a indicação da Ingestão Diária Recomendada (DRI). Os valores obtidos variaram de 20 a 171 ng g -1 de riboflavina e 408 a 2 188 ng g -1 de piridoxina nas amostras de geléia real analisadas. A tiamina não foi detectada. Segundo o "Food and Nutrition Board" (2000), as recomendações para estas vitaminas variam de 0,2-1,4 mg para a tiamina; 0,3-1,6 mg para a riboflavina e 0,1-2,0 mg para a piridoxina, dependendo da idade e sexo. Seguindo essas recomendações, a geléia real não pode ser considerada uma boa fonte dessas vitaminas, uma vez que elas aparecem na ordem de nanogramas por grama na geléia real. O método proposto pode ser utilizado em análises de rotina de geléia real tendo as vantagens de ser simples e rápido.Royal jelly is used as a food supplement, popularly known as rich in B vitamins. The present work has two objectives: firstly, to apply simultaneous quantitative determination by High Performance Liquid Chromatography of thiamin (vitamin B 1 ), riboflavin (vitamin B 2 ) and pyridoxine (vitamin B 6 ) and secondly to compare the obtained data with the Dietary Reference Intake (DRI) values. The values obtained showed no thiamin, a range from 20 to 171 ng g -1 of riboflavin and from 408 to 2 188 ng g -1 of pyridoxine in royal jelly. According to the Food and Nutrition Board (2000), the DRI of these vitamins varies from 0.2-1.4 mg for thiamin; 0.3-1.6 mg for riboflavin and 0.1-2.0 mg for pyridoxine, depending on age and sex. According to these recommendations, royal jelly is not a good source of vitamins B 1 , B 2 or B 6 as these vitamins appear only on order of ng g -1 . The proposed method can be used in routine analysis for royal jelly, having the advantage of being simple, fast and reliable.