Stereologic Characterization of Bovine (Bos taurus) Cumulus-Oocyte Complexes Aspirated from Small Antral Follicles During the Diestrous Phase1

Abstract

Bovine ovarian cumulus-oocyte complexes (COCs) are used for in vitro maturation and fertilization after selection by size and morphology, but their developmental potential remains low. Stereology could provide more objective criteria for selecting the most competent complexes, but its application is lacking in cattle. COCs from small (1-4 mm) antral follicles were aspirated from diestrous ovaries of Holstein-Friesian cows, fixed in glutaraldehyde, randomly embedded in glycol-methacrylate, and sectioned at 20 microm. The unbiased nucleator principle was used for estimating the mean volumes of complexes, oocytes, cumulus cells, and nuclei of oocytes and cumulus cells. The thickness of the zona pellucida and the relative numerical percentages of the several morphologic types of cumulus cells were also evaluated. The optical disector procedure was used for cumulus cell sampling. Volume estimation based on a real physical unique point did not differ from those based on a particular point among many or on a virtual central point, and the mean cumulus cell volume was estimated by using the single section bearing the unique reference point. Quantitative data showed that COCs appear heterogeneous for all studied parameters and that the cumulus mass contains three different cell populations.

Estudo estereológico comparativo de complexos cumulus-ovócito aspirados de folículos durante o ciclo estral em bovinos

“…1). Os ovários foram imediatamente transportados para o laboratório onde se aspirou o conteúdo dos folículos de 1-4mm e de 4-8mm de diâmetro, conforme descrito por Calado et al (2001Calado et al ( , 2003a (Tab. 1).…”

“…Selecionaram-se os COCs que apresentavam massa completa e compacta de células do cumulus e ooplasma com aspecto uniforme ( Fig. 2) (Leibfried e First, 1979;Madison et al, 1992;Blondin e Sirard, 1995 Os COCs foram processados segundo as exigências estereológicas, infiltrados e impregnados com glicol metacrilato (GMA; Historesina, Leica), e cortados em séries de 20µm de espessura em micrótomo automático equipado com faca de tungstênio (Calado et al, 2001(Calado et al, , 2003a, dos quais obtiveram-se, em média, 12 seções por COC. Elas foram coradas com mistura aquosa (2:1) de azul de metileno e azur II, e analisadas ao microscópio de luz acoplado a um microcater (com 0,5µm de resolução) para controle do movimento no eixo dos Z, e a uma câmara CCD.…”

“…Elas foram coradas com mistura aquosa (2:1) de azul de metileno e azur II, e analisadas ao microscópio de luz acoplado a um microcater (com 0,5µm de resolução) para controle do movimento no eixo dos Z, e a uma câmara CCD. O microscópio e o microcater foram ligados a um computador equipado com software Grid para análise estereológica (versão 1.09) (Calado et al, 2001(Calado et al, , 2003a.…”

“…3A), conforme descrito por Calado et al (2001Calado et al ( , 2003a. Os volumes médios dos COCs (Fig.…”

“…Recentemente, fez-se uma caracterização esterológica dos complexos cumulus-ovócito imaturos de bovino, aspirados de folículos antrais pequenos (1-4mm) e médios (4-8mm) durante o ciclo estral (Calado et al, 2001(Calado et al, , 2003a. Os objetivos deste trabalho foram: 1-realizar um estudo estereológico comparativo dos COCs de Bos taurus, 2-comparar algumas características morfológicas, nomeadamente volume dos COCs, dos ovócitos e respectivos núcleos e das células foliculares e respectivos núcleos, e espessura da zona pelúcida (ZP) dos COCs e 3-avaliar a homogeneidade do cumulus.…”